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《血管緊張素ⅱ受體1和受體2在小鼠腎小管發(fā)育中的表達》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、血管緊張素Ⅱ受體1和受體2在小鼠腎小管發(fā)育中的表達【摘要】目的探討血管緊張素Ⅱ受體1(AngiotensinⅡreceptortype1，AT1R)和受體2（(AngiotensinⅡreceptortype2，AT2R)在小鼠腎小管發(fā)育中的表達及其與腎臟發(fā)育的關(guān)系。方法采用免疫組織化學(xué)方法和體視學(xué)方法檢測胚齡14、15、16、18天胎鼠及生后1、3天仔鼠腎小管AT1R和AT2R的表達。結(jié)果AT1R于胚齡15天開始出現(xiàn)在腎小管，胚齡16天達到高峰，隨后表達逐漸減弱，生后3天微量表達；AT2R于胚齡16天開始出現(xiàn)在
2、腎小管，胚齡18天達到高峰，以后表達逐漸減弱，至生后3天基本消失。結(jié)論小鼠腎臟發(fā)育早期AT1R和AT2R與腎小管的增殖和分化密切相關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】血管緊張素Ⅱ受體1；血管緊張素Ⅱ受體2；小鼠；腎小管；體視學(xué)Abstract:ObjectiveToobservetheexpressionofangiotensinⅡAT1receptorandangiotensinⅡAT2receptorintubulesandinvestigatetherelationshipsbetandkidneydevelopmentinmo
3、use.MethodsTheexpressionofAT1receptorandAT2receptorinedandanalyzedinthekidneyofmouseembryosat14d,15d,16d,18d,16dbyimmunohistochemistry.ResultsAtE15,AT1receptoremerged.AtE16,theexpressionofAT1receptorerged.AtE18,theexpressionofAT2receptorostabundantandthendecr
4、easedgradually.ConclusionsItissupposedthattheexpressionofAT1receptorandAT2receptorappearstocorrelateentofmousekidney.Keyouse;tubule;stereology近年來研究證實，血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）是腎素血管緊張素系統(tǒng)中最重要的活性肽，在腎臟的發(fā)生發(fā)育中起著非常重要的作用［1］。AngⅡ主要通過與它的受體結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)功能，現(xiàn)在已經(jīng)明確的受體主要有血管緊張素Ⅱ受
5、體1(angiotensinⅡreceptortype1，AT1R)和受體2(angiotensinⅡreceptortype2，AT2R)［2］。已有研究證實AngⅡ?qū)δI小管有促增長、調(diào)亡的作用。但AngⅡ是與何種受體結(jié)合所發(fā)揮的這些作用還未明確。本實驗應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)并結(jié)合體視學(xué)方法觀察AT1R和AT2R在小鼠早期腎小管發(fā)育中的表達，探討AT1R和AT2R在早期腎小管發(fā)育中的作用機制。1材料和方法[*2]1.1材料25～30g的成年健康雌、雄性昆明系小白鼠24只，由錦州醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供；抗AT1R、
6、AT2R多克隆抗體、SABC試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司。1.2標(biāo)本制備昆明系小白鼠雌、雄（3∶1）同窩飼養(yǎng)。見雌鼠陰道栓出現(xiàn)計為胚齡（embryonicdays，E）0d。選取胚齡14d、15d、16d、18d的胎鼠及生后日齡1d、3d的仔鼠處死后剖腹取出腎臟，10%福爾馬林溶液固定，梯度酒精脫水，二甲苯透明，浸蠟，石蠟包埋，切片5μm。1.3AT1R和AT2R免疫組織化學(xué)染色(SABC法)將切片貼附于多聚賴氨酸處理過的載玻片上，進行免疫組織化學(xué)染色。染色步驟如下：二甲苯脫蠟，3%過氧化氫封閉內(nèi)源性過氧
7、化物酶，枸櫞酸鹽煮沸，正常山羊血清封閉，一抗（工作濃度1∶150）濕盒中4℃過夜，二抗37℃孵育30min，SABC37℃孵育30min，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片。以PBS代替一抗作陰性對照。1.4體視學(xué)測量每個動物的腎臟系統(tǒng)隨機選取5張切片，每張切片在油鏡下按“S”形等間隔選取視野，采用方格測試系統(tǒng)，交點計數(shù)法測算AT1R和AT2R在腎小管細(xì)胞陽性表達的體積密度（Volumedensity），參照系為腎皮質(zhì)，計算公式為Vv=Pi/Pc,其中Pi為測試系統(tǒng)落在陽性細(xì)胞上的點數(shù)，Pc為落在腎皮質(zhì)上的
8、點數(shù)。1.5統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS軟件進行方差分析，P<0.05認(rèn)為有顯著性差異。2結(jié)果[*2]2.1免疫組織化學(xué)染色結(jié)果AT1R和AT2R在小鼠腎小管中有不同程度的表達。細(xì)胞膜和細(xì)胞漿呈現(xiàn)不同程度的棕黃色為陽性結(jié)果(照片1～2)。3討論AngⅡ的生物學(xué)效應(yīng)是與其受體結(jié)合實現(xiàn)的，AngⅡ的特異受體主要有AT1R和AT2R。AT1R和AT2R均屬于G蛋白偶聯(lián)受體［3］
