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《細(xì)胞型朊蛋白（prpc）受體或受體源的篩選》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、細(xì)胞型朊蛋白（PrPc）受體或受體源的篩選【關(guān)鍵詞】細(xì)胞型朊蛋白關(guān)鍵詞:細(xì)胞型朊蛋白;受體，細(xì)胞型朊蛋白;細(xì)胞粘附分子;小腦顆粒細(xì)胞摘要:目的本研究表達(dá)了細(xì)胞型朊蛋白（PrPc）和堿性磷酸酶（AP）的融合蛋白（PrPAP），并以此融合蛋白作為配體通過結(jié)合實(shí)驗(yàn)尋找PrPc的受體（或結(jié)合蛋白）.方法以堿性磷酸酶組織化學(xué)法檢測(cè)表達(dá)PrPAP的細(xì)胞培養(yǎng)液與細(xì)胞表達(dá)的細(xì)胞粘附分子、少突膠質(zhì)細(xì)胞和雪旺氏細(xì)胞系以及原代培養(yǎng)的小腦顆粒細(xì)胞的結(jié)合，并以含AP的細(xì)胞培養(yǎng)液作對(duì)照，陽性對(duì)照為KitAP及其細(xì)胞表面表達(dá)受體的結(jié)合.結(jié)果在所表達(dá)的細(xì)胞粘附分子中，NCAM14
2、0有疑似結(jié)合，其他L1，CHL1，P0，Tag，F(xiàn)3及PrP未見與朊蛋白的陽性結(jié)合;約有20%呈現(xiàn)雪旺氏細(xì)胞陽性結(jié)合，少突膠質(zhì)細(xì)胞陽性結(jié)合率約為60%;原代培養(yǎng)的小腦顆粒細(xì)胞與朊蛋白有幾乎100%的陽性結(jié)合，并且細(xì)胞密度高.AP對(duì)照僅有微弱染色.結(jié)論推測(cè)朊蛋白的功能作用方式為異嗜性結(jié)合;確定原代培養(yǎng)小腦顆粒細(xì)胞為進(jìn)一步分離提純朊蛋白受體的起始材料，并提示小腦和朊蛋白功能及朊蛋白疾病的可能相關(guān)性. Keyolecule;cerebellargra-nuleneurons Abstract:AIMToexpress，arebinantprotein
3、PrPAPcontainingtheextracellularpartofprionproteinandalkalinephosphatase（AP）inasecretedformintheculturesuper-natant.andtouseitasaligandtosearchforreceptors（orbindingproteins）forprionproteinthroughbindingassay.METHODSAPhistochemistryolecules，culturedoligodendrocytesandScharycul-
4、turedcerebellargranuleneurons.TheculturesupernatantcontainingAPongthecelladhesionmoleculesde-tected，onlyNCAM140shobiguouspositivebinding，theothermoleculesL1，CHL1，P0，Tag，F(xiàn)3andPrPhadnobindingately20%positivebinding，thebindingrateforoligoden-drocytesaryculturedcerebel-largranulen
5、euronshadalmost100%cellsbindingaterialforthefurtherseparationofreceptorsforprionprotein.It’simpliedthatcerebellummighthaveacloserelationshipine（LifeTechnolo-gies，Germany），細(xì)胞培養(yǎng)液成分（LifeTechnolo-gies，Germany），PrP抗體（Charles（120，140，180），P0，PrP（德國(guó)漢堡大學(xué)分子神經(jīng)生物研究所提供）;④動(dòng)物:C57BL/6J野生型小鼠（
6、德國(guó)漢堡大學(xué)分子神經(jīng)生物研究所動(dòng)物中心提供）. 1.2方法①表達(dá)PrPAP和AP:以Lipofec-tamine轉(zhuǎn)染PrPAP質(zhì)粒至293-EBNA細(xì)胞中，48h后，收集細(xì)胞培養(yǎng)液，同時(shí)培養(yǎng)表達(dá)堿性磷酸酶（AP）的細(xì)胞并收集培養(yǎng)液，以ELISA法檢測(cè)PrP和AP活性;②粘附分子的表達(dá):同樣以Lipofectamine分別將L1，CHL1轉(zhuǎn)染到L929細(xì)胞中，F(xiàn)3，Tag轉(zhuǎn)染到CHO細(xì)胞中，NCAM（120，140，180），P0，PrP至COS-1細(xì)胞中，并且以略去相應(yīng)DNA的模擬轉(zhuǎn)染細(xì)胞作為對(duì)照;③細(xì)胞系的培養(yǎng):少突膠質(zhì)細(xì)胞系OLN-93以DM
7、EM，100mL・L-1FCS，5×103U・L-1青霉素和50mg・L-1鏈霉素培養(yǎng)液37℃，50mol・L1CO2孵育箱內(nèi)培養(yǎng)至細(xì)胞80%鋪滿.雪旺氏細(xì)胞系S16以DMEM，100mL・L-1FCS，50mg・L-1慶大霉素培養(yǎng)液37℃，50mol・L-1CO2孵育箱內(nèi)培養(yǎng)至細(xì)胞80%鋪滿;④原代小腦顆粒細(xì)胞培養(yǎng):小腦顆粒細(xì)胞培養(yǎng)自6～8d的C57BL/6J野生型小鼠小腦，方法依據(jù)文獻(xiàn)［2］，細(xì)胞重懸和培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)液加1g・L-1
8、BSA，2.2g・L-1NaH-CO3，100mg・L-1Na2CO3，27IU・
