碳粒廓清實(shí)驗(yàn)課件

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1、小白鼠碳粒廓清實(shí)驗(yàn)一、目的要求學(xué)習(xí)碳廓清實(shí)驗(yàn)的原理與方法;進(jìn)一步練習(xí)小鼠的眼眶后靜脈叢注射和采血方法?;瘜W(xué)物對(duì)免疫系統(tǒng)的影響:免疫抑制超敏反應(yīng)自身免疫反應(yīng)機(jī)體的免疫系統(tǒng):免疫器官或組織中樞免疫器官(骨髓和胸腺)外周(脾臟和淋巴結(jié))免疫細(xì)胞免疫分子免疫器官或組織要反應(yīng)機(jī)體的免疫功能,包括很多方面,比如體液免疫功能,細(xì)胞免疫功能,NK和巨噬細(xì)胞的吞噬功能等等,通常用一組實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)明機(jī)體的免疫功能(不能單憑一個(gè)實(shí)驗(yàn))。檢測(cè)的方法也有很多,比如免疫器官的重量和臟器系數(shù);T、B淋巴細(xì)胞的分型(流式細(xì)胞儀);放射免疫方法、碳廓清實(shí)驗(yàn)等。二、基本原理一定濃度的碳粒經(jīng)小鼠眼眶后靜脈叢注射進(jìn)

2、入血液,經(jīng)血流帶到肝,脾等處,而被這些部位的巨噬細(xì)胞吞噬清除。在一定濃度范圍內(nèi),碳粒的清除速率與其劑量成呈指函數(shù)關(guān)系,即吞噬速度與血液中碳粒濃度成正比,而與已吞噬的碳粒量成反比。若以血中碳粒濃度的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo),時(shí)間為橫坐標(biāo),兩者則呈直線關(guān)系,其斜率(k)值表示吞噬速度,即未經(jīng)校正的吞噬指數(shù)。這是因?yàn)樾∈蟾?,脾重量不等,故k值不同,所以,一般以校正的吞噬指數(shù)α表示,反映了每單位組織重量的吞噬活性。計(jì)算公式如下:α=體重/(肝重+脾重)×K1/3圖1吸光度(對(duì)數(shù)值)—時(shí)間曲線K=(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1)三、材料健康昆明種小鼠,6-8周齡,體重18-22g。

3、印度墨汁:以生理鹽水稀釋3-4倍(臨用前配制)0.1%Na2CO3:0.1gNa2CO3加雙蒸水至100ml(臨用前配制)肝素:250u/ml天平、注射器、鑷子、手術(shù)剪,濾紙,毛細(xì)管、血色素吸管(或硬質(zhì)玻璃尖嘴滴管)、小試管、載玻片、玻璃平皿、計(jì)時(shí)器、7230分光光度計(jì)四操作步驟小鼠稱(chēng)重用印度墨汁,按小鼠每10g體重0.05ml計(jì)算,經(jīng)左眼眼眶后靜脈叢注入體內(nèi),注射完畢,立即計(jì)時(shí)(注意注射的深度和力度)。注入墨汁后2~20分鐘內(nèi)選兩個(gè)時(shí)點(diǎn)(例如2分鐘,10分鐘,可以自定時(shí)間,但兩次間隔時(shí)間要長(zhǎng)一些),用預(yù)先肝素處理的毛細(xì)管分別從右眼眶靜脈叢取血20μl,置入盛有2mlNa

4、2CO3溶液的試管中,搖勻。0.5cm比色杯在721分光光度計(jì)600nm波長(zhǎng)處測(cè)光密度(OD),用0.1%Na2CO3溶液為空白。處死小鼠,取肝,脾稱(chēng)重(若肝脾皆變黑,說(shuō)明注射成功)。五計(jì)算與結(jié)果按下式計(jì)算吞噬指數(shù)αK=(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1)K為未經(jīng)校正的吞噬指數(shù)。OD1為t1(例如2分鐘)血標(biāo)本的OD值OD2為t2(例如10分鐘)血標(biāo)本的OD值吞噬指數(shù)α=體重/(肝重+脾重)×K1/3六注意事項(xiàng)靜脈注入碳粒的量,取血時(shí)間,取血量一定要準(zhǔn)。墨汁經(jīng)放置,碳粒沉于瓶底,臨用前應(yīng)搖勻。因每只小鼠要連續(xù)取血數(shù)次,所以每次眼眶內(nèi)取血時(shí),應(yīng)盡量減少出血。

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