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1、淺談糖化血紅蛋白檢測戴雨希(南京市秦淮區(qū)止馬營社區(qū)衛(wèi)生服務中心江蘇南京210000)摘要：目的:探討目前常見的各種糖化血紅蛋白檢測方法及其在臨床實踐中的應用價值。方法:介紹了離子層析法、電泳法、親和層析、離子捕獲法和免疫凝集法在臨床檢測糖化血紅蛋白中的應用。結果:糖化血紅蛋白測定方法眾多，但離子交換層析法精密度高，重復性好，且操作簡單是目前最適合臨床開展的檢測方法。關鍵詞：糖化血紅蛋白;檢測;應用價值正常人有三種血紅蛋白:HbA,HbF,HbA2,而成人紅細胞中主要含有HbA。在用層析法分離血紅蛋白時，可
2、洗脫出3種含糖成分即:HbAla,HbAlb,HbAlc,合稱為糖化血紅蛋白。糖化血紅蛋白是血液中紅細胞內的血紅蛋白與血糖結合的產(chǎn)物。糖化血紅蛋白越高表示血糖與血紅蛋白結合越多,糖尿病病情也越重。血糖是通過彌散方式進入細胞內的，無需胰島素參與。血糖與血紅蛋白的結合過程很緩慢，而且是不可逆的，在紅細胞死亡之前一直存在，故體內衰老紅細胞比新牛.紅細胞的糖化血紅蛋白含量約高出1.5倍。每一個紅細胞內都有血紅蛋白，而紅細胞的壽命為120d,平均60d,所以糖化血紅蛋白比例,能反應測定前1個?2個月的平均血糖水平。
3、糖化血紅蛋白(HbAlc)檢測用于常規(guī)實驗室始于20世紀70年代末期，且穩(wěn)定發(fā)展至今，檢查糖化血紅蛋白己成為了解糖尿病控制良好與否的重要指標。國外已將糖化血紅蛋白監(jiān)測作為糖尿病療效判定和調整治療方案的“金指標”。目前臨床實驗室中應用的糖化血紅蛋白檢測方法主要有兩類:一類方法基于糖化血紅蛋白與非糖化血紅蛋白所帶的電荷不同，如離子層析法、電泳等方法;另一類方法基于血紅蛋白上糖化基團的結構特點，如親和層析、離子捕獲法和免疫凝集法等。其中高壓液相離子層析法(HPLC)被公認為金標法。1離子層析法基于血紅蛋白&be
4、ta;鏈N末端纈氨酸糖化后所帶電荷不同，在偏酸溶液中,GHb及HbA均勻具有陽離子的特性，因此，當它們經(jīng)過陽離子交換層析柱吋，就可被偏酸的緩沖液平衡過的樹脂來吸附，但GHb與HbA對抗脂吸附率不同，用PH6.8的磷酸鹽緩沖液可以先將正電荷較少,吸附率較弱的GHb漂洗下來，再用PH6.4的磷酸鹽緩沖液洗脫正電荷較多,吸附率較強的HbA。KCN可將Hb轉化為高鐵氰化血紅蛋白,用分光光度計測定。2手工微柱法有Bio-Rad和西班牙BIOSYSYEMS等多家公司產(chǎn)品，手式微柱操作會受到人工因素影響，可能會洗脫不完
5、全或過度洗脫并受外界環(huán)境溫度的影響，而某些血紅蛋白如HbF異常增加吋，也會與糖化血紅蛋白冋吋洗脫，從而使結果產(chǎn)生偏差。相應的儀器以英國DREWSCENTIFIC公司DS5糖化血紅蛋白儀為例（BIO-RAD公司DIASTA亦為同一產(chǎn)品）,采用微柱法離子交換層析和梯度洗脫技術可全自動分離血紅蛋白的變異體與亞刑，除可測定糖化血紅蛋白外，還可同吋檢測出HbS與HbC的存在與否，在計算糖化血紅蛋白值吋會自動扣除變異體產(chǎn)生的影響，從而使結果更為準確,可靠,CV值<2%。同吋該儀器配有專門的稀釋溶血器，可直接進行
6、全血操作,5min即可報告結果，并自動儲存樣品檢測結果，層析柱價格也較為低廉,適合于較多標本的醫(yī)院檢測。離子層析法精密度高、重復性好II操作簡單,己被臨床廣泛采用。國內主要采用Bio-Rex70陽離子樹脂微柱層析法，其微柱可重復使用多次。3高壓液相法（HPLC）近二十年來發(fā)展起來的一項新穎快速的分離技術較為準確，除對糖化血紅蛋白測定外還對血紅蛋白各組分進行分析。但手工微柱法操作受到操作因素的影響,可能會導致洗脫不完全或過度洗脫，并受外界溫度、某些異常血紅蛋白的影響而使結果發(fā)生偏差。儀器法采用微拄法離子交換
7、層析和梯度洗脫技術可全自動分離血紅蛋ft的變異體與亞型。這類方法雖然操作快速，技術簡單，但是要特別注意控制標本量和分離吋的溫度,同時要選購具有準確PH值和離子強度的緩沖液和優(yōu)質樹脂，儀器昂貴難普及。0前HPLC法測定HbAlc使其準確性和重復性得到很人的提高。美國臨床化學協(xié)（AACC＞糖化血紅蛋白標準化分會和IFCCHbAIC標準化工作組建議，以DCCT研究中所指定的方法,HPLC方法作為檢測糖化血紅蛋白的金標準,希望以此使人多數(shù)的實驗方法能夠參照指定的方法實現(xiàn)標準化。4電泳方法Hb及HbAl帶正電荷,電
8、泳時向負極移動。因為HbA的β鏈N-末端所帶電荷被糖基消除，帶電量少于HbA,等電點低，泳動速度慢，所以HbAl即GHbHb本身帶紅色，所以可直接比色或掃描。用HbAl占Hb的量來表示。毛細管電泳也能分離檢測糖化血紅蛋白和血紅蛋白的變異體。普通電泳法對HbA和HbAl分離效果不理想，目前尚無商品化,具有批量樣本通過能力的儀器面世，相當程度地限制了該方法的臨床應用。5離子捕獲法近發(fā)展起來的新方法，代表儀器有Abbott
