親和層析應用

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1、親和層析的應用親和層析親和層析（affinitychromatography）是利用待分離物質和它的特異性配體間具有特異的親和力，從而達到分離目的的一類特殊層析技術。親和層析法具有多方面的應用。核酸的純化因為DNA與RNA之間具有專一性的親和力，所以親和層析可應用于核酸的研究，例如從大腸桿菌的RNA混合物中分離出專一于噬菌體T4的RNA，可將T4的DNA以共價鍵結方式接于cellulose材質的管柱中，再將所要的RNA分離出。此外，根據(jù)核酸與蛋白質之間交互作用的原理，可以將單股DNA接在Sepharose上，純化DNA聚合酶或RNA聚合酶。激素受體的純化激素受體是細胞膜上與特定激素結合的成份，

2、激素和受體的作用具有特異性，目前用親和層析法已經(jīng)能夠將激素與sephrose的組合，純化胰島素、正甲狀腺素的受體。抗體與抗原的純化抗體與抗原結合具有高度專一性，Sepharose是這一類親和層析較佳的載體，由于抗原-抗體復合物的解離常數(shù)很低，因此抗原在固定化抗體上被吸附后，要盡快將它洗出，沖洗液的條件通常是控制pH值至3以下，成份為醋酸、鹽酸、Tris-HCl緩沖液、20%甲酸或1mol/L丙酸，也有使用尿素這一類的蛋白質變性劑作為洗出用的溶液。酶和酶的抑制劑純化使用親和層析法純化酶，可以得到相當好的效果。例如，要分離豬和牛的胰蛋白酶，可以連接雞卵黏蛋白（胰蛋白酶的抑制劑）與Sepharose

3、4B當作層析柱材質，用它純化出來的胰蛋白酶相當于5次再結晶的純度。除了使用抑制劑當配體，也可以反過來用酶作為配體來純化抑制劑，例如，將胰蛋白酶接到Sepharose上，能有效分離純化大腸桿菌中的胰蛋白抑制劑Ecotin。Chitin幾丁質CHOM雞蛋粘多糖蛋白Trypsin胰島素親和層析的應用親和層析法分離膽固醇氧化酶季文明,陳毅力等江南大學生物工程學院親和層析法分離膽固醇氧化酶膽固醇氧化酶是一種多功能酶。目前,醫(yī)院應用膽固醇氧化酶檢測血清膽固醇含量。膽固醇氧化酶可以降低食品中的膽固醇含量；能有效抑制鱗翅目昆蟲的生長繁殖,是一種生物殺蟲劑；膽固醇的氧化產(chǎn)物膽甾-4-烯-3-酮還具有抗肥胖、治療

4、肝病等藥效。親和層析法分離膽固醇氧化酶發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)過鹽析操作以后，得到層析用樣品。他們利用一種脂溶性凝膠SepherdexLH20作為膽固醇的載體,其分離的分子量小于3000。膽固醇也為脂溶性的化合物,與凝膠LH20有很好的相容性,而酶蛋白不能進入凝膠。親和層析法分離膽固醇氧化酶他們每次進行實驗時加入1~5ml的樣品,用1~5倍體積的緩沖液A洗去雜物,流速為0.5~2ml/min；然后再用緩沖液B洗脫酶蛋白,流速為015~2ml/min。親和層析法分離膽固醇氧化酶他們對表面活性劑的濃度和洗脫速度的條件進行了考察，得到用親和層析分離純化膽固醇氧化酶,酶比活從0.45U/mg提高到15.5U/mg。

5、親和層析的適合條件為洗脫液A的流速是015ml/min,洗脫液B的流速是210ml/min。實驗室內可用此法分離純化膽固醇氧化酶,但是從實際操作和經(jīng)濟角度考慮，該法不適合大規(guī)模處理。謝謝大家！學習動物精神11、機智應變的猴子：工作的流程有時往往是一成不變的，新人的優(yōu)勢在于不了解既有的做法，而能創(chuàng)造出新的創(chuàng)意與點子。一味地接受工作的交付，只能學到工作方法的皮毛，能思考應變的人，才會學到方法的精髓。學習動物精神12、善解人意的海豚：常常問自己：我是主管該怎么辦才能有助于更好的處理事情的方法。在工作上善解人意，會減輕主管、共事者的負擔，也讓你更具人緣。謝謝大家！