igg在人肝細胞肝癌中的表達及其臨床特征分析

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1、IgG在人肝細胞肝癌中的表達及其臨床特征分析近來多項研究證明，乳腺癌、大腸癌、胃癌和肺癌等源于上皮的惡性腫瘤細胞可以產生IgG[1-6]。邱曉彥等[4]最早發(fā)現(xiàn)Ig樣蛋白的表達與惡性腫瘤的分化有關；依據腫瘤的分化程度不同，Ig樣蛋白的表達水平也不同，即分化程度越高，表達強度越低，并證實該Ig樣蛋白為IgG；葉雪等[7]發(fā)現(xiàn)在惡性卵巢上皮性癌中IgG的表達強度明顯高于正常卵巢，IgG的表達水平與卵巢癌的臨床分期和病理分級無相關性；李浩勇等[6]對膀胱癌研究發(fā)現(xiàn)：膀胱癌細胞能夠表達IgG，其抗體體外對膀胱腫瘤細胞的生長具

2、有一定的抑制作用，且具有促進癌細胞凋亡的效應；Niu等[8]研究了IgG的表達與結直腸癌的生物學指標和臨床病理學指標的關系，通過siRNA干擾下調IgG的表達，可以抑制結直腸癌細胞（LOVO細胞）的增殖、克隆形成和侵襲能力，提示腫瘤源性IgG具有促進腫瘤生長，轉移的作用。肝癌亦屬于上皮性惡性腫瘤，但是目前對于IgG在肝癌組織中的表達與分布情況及其與臨床病理學指標的關系的研究尚未有報道。本實驗采用免疫組化技術和原位雜交技術檢測肝癌組織中IgG的表達情況，進而分析其表達水平和肝細胞肝癌9項臨床病理學指標的關系，以期為肝細

3、胞肝癌的診斷、治療和預后評估提供新的方法和思路。1材料與方法1.1材料收集濰坊醫(yī)學院附屬醫(yī)院和濰坊市民醫(yī)院2010-2012年手術切除的肝癌標本60例，其中男40例，女20例，平均年齡45歲，患者術前均未采取任何治療措施。所有肝癌病例隨訪12～18個月。本實驗經濰坊醫(yī)學院倫理委員會批準，并獲得患者的書面許可。所有新鮮標本均經4%多聚甲醛/PBS固定，石蠟包埋，連續(xù)4m厚度切片。1.2免疫組化方法采用PV-9000兩步法（試劑盒購自美國Zymed公司）進行免疫組化檢測。切片常規(guī)脫蠟，入水，枸櫞酸鹽緩沖液微波抗原修復，經

4、3%過氧化氫37℃孵育20min后，滴加小鼠抗人IgG單克隆抗體（1：1000，購自美國sigma公司），4℃濕盒過夜，滴加試劑1（聚合物輔助劑），37℃孵育30min，滴加試劑2（辣根過氧化素）標記二抗，37℃孵育30min。各步驟之間均是PBS沖洗3次，每次5min。AEC顯色，蘇木素復染，甘油明膠封片。以手術切除的扁桃體組織作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。1.3原位雜交方法切片二甲苯脫蠟，乙醇梯度透明至PBS反復沖洗，酶消化，經預雜交，滴50L含探針的雜交液，45℃保溫，20h。將切片浸泡于5SSC（

5、37℃）中，后依次經5%甲酰胺2SSC（37℃）清洗15min。PBSBufferⅠ漂洗一次后，滴加50L馬血清封閉液，置濕暗盒中室溫1h。后滴加Anti-Dig-Ab（1∶100，購自瑞士roche公司），室溫1h后BufferⅠ、Ⅱ液依次漂洗數次，NBT-BCIP顯色。以結腸黏膜下孤立淋巴結作為陽性對照，以IgG正義探針代替反義探針作為陰性對照。1.4免疫組織化學結果評分采用雙盲法，由3位病理學教授在400的顯微放大倍數下隨機對染色切片獨立評分，所得平均分作為最終結果。評分標準如下：（1）陽性細胞數所占比例：小于

6、5%為0，5%～25%為1，25%～50%為2，大于50%為3；（2）染色強度：未著色為0，淡紅色或粉紅色為1，紅色為2，深紅色為3。兩項測量標準得分之和為0～3分的切片標記為弱染色，陰性；4～6分的切片標記為強染色，陽性。1.5統(tǒng)計學處理采用SPSS18.0統(tǒng)計學軟件對數據進行處理，計數資料比較采用Pearson字2及Fisher確切概率法檢驗分析，評估IgG的表達情況與臨床病理學參數（年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤個數、腫瘤分化程度、AFP濃度、pTNM分期、1年內是否復發(fā)或轉移）之間的相關性。以P0.05為差異有統(tǒng)

7、計學意義。2結果2.1IgG蛋白在肝癌組織的表達及免疫組化檢測結果經免疫組化檢測結果顯示60例肝癌組織的IgG蛋白陽性率為85.00%（51/60），癌周正常肝組織的陽性率為6.67%（4/60），兩者比較差異有統(tǒng)計學意義（P=0.001）。IgG蛋白陽性染色主要定位于肝癌細胞胞漿和胞膜。2.2IgGmRNA在肝癌組織的表達及原位雜交結果IgGmRNA陽性信號位于肝細胞肝癌細胞胞漿，為藍紫色，呈顆粒狀，與免疫組化結果具有良好的一致性，從mRNA水平證實了肝細胞肝癌組織自身具有產生IgG的能力。2.3IgG在肝癌組織中

8、的表達和臨床病理學指標的關系IgG的異常高表達與肝細胞肝癌分化程度和pTNM分期呈負相關（r=-0.357，P=0.005；r=-0.296，P=0.021）；與血漿AFP濃度呈正相關（r=0.336，P=0.009）；與年齡、性別、腫瘤包膜完整性、腫瘤大小、腫瘤個數和一年內是否復發(fā)與轉移無相關性（P0.05），見表1。3討論免疫球蛋白G（im