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《雷帕霉素對(duì)膿毒癥大鼠肝臟損害的保護(hù)作用及其機(jī)制》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、密級(jí)編號(hào)分類號(hào)UDCUNIVERSITYOFSOUTHCHINA碩士學(xué)位論文雷帕霉素對(duì)膿毒癥大鼠肝臟損害的保護(hù)作用及其機(jī)制研究生姓名：尹建亞指導(dǎo)教師姓名、職稱：卿國(guó)忠主任醫(yī)師/教授學(xué)科、專業(yè)名稱：內(nèi)科學(xué)研究方向：危重癥的救治2014年12月南華大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研宄工作及取得的研宄成果。盡我所知，除了論文屮特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文屮不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得南華大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我共同工作的同志對(duì)木研宄所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的
2、說(shuō)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。作者簽名：年月日南華大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文是本人在南華大學(xué)攻讀（博/碩）士學(xué)位期間在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的學(xué)位論文。本論文的研宄成果歸南華大學(xué)所有，本論文的研宄內(nèi)容不得以其它單位的名義發(fā)表。本人同意南華大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被査閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以釆用復(fù)印、縮印或其它手段保留學(xué)位論文；學(xué)?？筛鶕?jù)國(guó)家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文。同意學(xué)校將論文加入《中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》，并按《中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論
3、文全文數(shù)據(jù)庫(kù)出版章程》規(guī)定享受相關(guān)權(quán)益。同意授權(quán)屮國(guó)科學(xué)信息技術(shù)研宄所將本學(xué)位論文收澩到《屮國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。對(duì)于涉密的學(xué)位論文，解密后適用該授權(quán)。作者簽名：導(dǎo)師簽名：年月日年月曰中文摘要1英文摘要3政51弓I胃52實(shí)驗(yàn)材料73實(shí)驗(yàn)方法94實(shí)驗(yàn)結(jié)果125i寸i侖236結(jié)論——26參考文獻(xiàn)27主要英文縮略語(yǔ)索引31文獻(xiàn)綜述-33碩士期間發(fā)表的論文40翻寸41雷帕霉素對(duì)膿毒癥大鼠肝臟損害的保護(hù)作用及其機(jī)制研究生：尹建亞導(dǎo)師：卿國(guó)忠教授專業(yè)：A科學(xué)中文摘要目的：氧化應(yīng)激是膿毒癥誘發(fā)肝臟損害的關(guān)鍵因素。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，
4、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mammaliantargetofrapamycin，mTOR)在氧化應(yīng)激過(guò)程中起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。本文觀察mTOR抑制劑雷帕霉素對(duì)膿毒癥大鼠肝損害的保護(hù)作用，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探討。方法：60只Wistar雄性大鼠隨機(jī)分成三組：假手術(shù)組(10只)、膿毒癥組(10只)、膿毒癥+雷帕霉素組(20只)和膿毒癥+PBS組(20只)。采用盲腸結(jié)扎穿刺法(cecalligationandpuncture，CLP)制作膿毒癥模型。在實(shí)驗(yàn)前2h進(jìn)行雷帕霉素(lmg/kg/d)灌胃處理，對(duì)照組采用同等劑量的PBS處理。大鼠眼眶取血，采用終點(diǎn)
5、法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)(3、6、12、24h)血淸丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)水平；雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清氧化應(yīng)激標(biāo)志物8-輕基脫氧鳥(niǎo)苷(8-hydroxy-2Ldeoxyguanosine，8-OHdG)的水平；提取肝臟組織制備10%的勻漿液，離心后取上清液檢測(cè)8-OhdG；并檢測(cè)肝臟組織超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)＞谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathioneperoxidase，GSH-Px)、過(guò)氧化氫酶(catalase，CAT)的活性和丙二醛(malonal
6、dehyde,MDA)含量，采用實(shí)時(shí)定量PCR(Real-TimePCR)檢測(cè)mTOR的表達(dá)；蛋白免疫印跡法(Western-blot)檢測(cè)mTOR、核糖體S6蛋白激酶(S6kinase，S6K)、磷酸化核糖體S6蛋白激酶(p-S6K)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的含量。不同濃度雷帕霉素(0、10、20、40pM)預(yù)處理HepG2細(xì)胞4h后，用200
7、iM過(guò)氧化氫(H2O2)處理細(xì)胞3h。DCFH-DA探針?lè)z測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧，ELISA法檢測(cè)MDA和SOD含量,Western-blot法檢測(cè)p-S6K和p-AKT的水平。結(jié)
8、果：相對(duì)于假手術(shù)組，CLP法處理動(dòng)物后，血清ALT、AST、和8-OHdG的水平明顯增高，肝臟組織SOD、GSH-Px和CAT活性降低，而8-OHdG水平和MDA活性明顯升高；Real-TimePCR和/或Western-blot結(jié)果顯示，CLP術(shù)后大鼠肝臟組織mTOR的表達(dá)明顯升高，p-S6K和p-AKT水平增加，而S6K和AKT的表達(dá)不變。采用雷帕霉素處理顯著降低CLP術(shù)后血清ALT、AST和8-OHdG的水平；并顯著升高肝臟組織SOD、GSH-Px和CAT活性，降低MDA、p-S6K和p-AKT水平。不同濃度雷帕霉素預(yù)處理HepG2細(xì)胞后，降
9、低H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)活性氧生成，并降低MDA含量和上調(diào)SOD水平；Western-blot結(jié)果顯示，雷帕霉素降低p-S6
