[應用文書]應用文書

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1、項目11：乙型肝炎病毒標志物的檢測【目的要求】1、熟悉ELISA的原理擴操作方法。2、掌握乙肝病毒標志物的臨床意義?！緦嶒瀮热荨俊　∫倚透窝撞《灸壳芭囵B(yǎng)困難，臨床主要測定乙型肝炎病毒的各種抗原和抗體做輔助診斷。實驗室常用對流免疫電泳法及反向間接血凝法。目前臨床上多用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)?！驹怼竣偈箍乖蚩贵w結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用

2、洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開，最后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據顏色反應的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度?！‰p抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，將特異性抗-HBs吸附于固相載體表面，當加入待檢血清中相應的HBsAg時，結合形成Ag-Ab復合物，加入過氧化物酶標記的抗-HBs酶結合物，有酶相應底物存在情況下，產生顏色變化，用肉眼判讀或酶標儀測定結果。間

3、接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱為間接法。先將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質；后加稀釋的受檢血清，其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質由于不能與固相抗原結合，在洗滌過程中被洗去?！静牧稀俊　?．包被液：0.2MpH9.6的碳酸鹽緩沖液2．洗滌液：0.02MpH7.4的PBS-Tween20(0.05％)液3．酶結合物：用辣根過氧化物酶標記的抗－HBs4．酶抗體稀釋液：0.01MpH7.4的PBS

4、-Tween20(0.05％)液5．酶底物液：鄰苯二胺(OPD)10mg溶于pH5.0的磷酸鹽-檸檬酸緩沖液25m1中，臨用前加入30％H2O212ml。新鮮配制，避光6．中止液：2MH2SO47．待檢血清、陽性血清、陰性血清8．聚苯乙烯微量板，微量移液器，吸頭等【方法】1．包被：用包被液稀釋抗-HBs為50ug／ml，加入微量板100ul/孔，置40℃過液后，用洗滌液洗3次每次3~5min。2．加樣：加入稀釋為1／50的待檢血清100ml／孔每個標本作2孔，同時作陽性、陰性和空白對照，置37℃2h后洗滌3次。3．加酶結合物：加入經適當稀釋的酶結合物100ul／孔

5、，置37℃2h后洗滌3次。4．加底物液100ul/孔，避光置于37℃20~30min。5．中止反應：加1滴／孔中止液?！窘Y果】　　肉眼判讀時，待測孔顏色與陰性對照一樣或更淺，判為陰性。若明顯加深，呈黃棕色，判為陽性。用酶標儀檢測時，P／N值＞2．1為陽性，＜2．1為陰性。P為被檢標本OD值，N為陰性對照OD值?！　「戒洠骸。ㄒ唬┮腋尾《颈砻鏄酥緳z測的臨床意義1．稱大三陽，為慢性肝炎，處于活動期。有較強的傳染性。2．稱小三陽，為慢性攜帶者，乙肝已趨向恢復，傳染性弱，如持續(xù)時間過久，可轉化為肝癌?！　?．感染階段或慢性乙肝表面抗原攜帶者，傳染性弱。　　4．感染過乙肝病

6、毒，具有一定的免疫力，為不典型的恢復期或為急性乙肝感染期。5．乙肝感染，為肝炎恢復期，少數(shù)人仍有傳染性。6．去有乙肝感染或現(xiàn)在正處于急性感染。7．前打過乙肝疫苗或以前感染過乙肝。8．性乙肝恢復期，以前感染過乙肝。9．急性感染早期或者慢性乙肝表面抗原攜帶者，傳染性弱。10．慢性乙肝表面抗原攜帶者，較易轉陰，或者是急性感染，趨向恢復。11．早期乙肝感染，或慢性攜帶者，傳染性強。12．急性乙肝感染趨向恢復，或者為慢性攜帶者?！　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。ǘ㏄CR方法檢測病原微生物　　多聚酶鏈反

7、應(polymerasechainreaction，PCR)是一種模擬天然DNA復制過程，在體外擴增特異性DNA（或RNA）片段的新技術。本實驗是將待檢雙鏈DNA經94℃高溫變性成單鏈作模板，然后加入一對人工合成的寡核苷酸引物，引物分別與待擴增DNA片段的兩端互補，經55℃低溫退火，引物與模板互補結合。在72℃條件下，結合于模板上的引物在DNA聚合酶的催化下，利用反應體系中的4種dNTP為原料，按堿基互補配對的方式延伸合成兩條新的DNA鏈。經過20-30個周期后，特異的目的DNA可擴增百萬倍以上。PCR產物經瓊脂糖凝膠電泳后即可觀察到特異的擴增條帶。PCR方法操作

8、簡便，靈敏