[生物學(xué)]杜鵑花屬植物的rapd標(biāo)記研究

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1、Y783678分類號：S685.210949.7723學(xué)號：S200218Q(的四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文杜鵑花屬植物的RAPD標(biāo)記研究段國鋒指導(dǎo)教師：肖千文副教授胤主英副教授學(xué)科專業(yè)：森林培育學(xué)研究方向.經(jīng)濟(jì)林培育摘要本研究對RAPD-PCR的反應(yīng)體系進(jìn)行了優(yōu)化，并利用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)技術(shù)，對24種杜鵑花屬(Rhododendron)植物進(jìn)行基因組多態(tài)性分析。共篩選了60個隨機(jī)引物，其中4個隨機(jī)引物的擴(kuò)增產(chǎn)物多態(tài)性明顯，獲得清晰重復(fù)性好的條帶。在NTSYS-pc軟件中，統(tǒng)計擴(kuò)增產(chǎn)物條帶數(shù)，用來計算Jaccard遺傳相似系數(shù)和遺傳距離，建

2、立UMPGA聚類分析圖。結(jié)果表明：1.獲得較好的反應(yīng)程序和反應(yīng)體系為：反應(yīng)程序?yàn)椋?5°C預(yù)變性lmin;94PC變性lmin;34t)退火lrain;72°0延伸2min:45個循環(huán)；72*0延伸5rain;保存。反應(yīng)體系(20W反應(yīng)體系）為:模板DNA(10ngM)L5^1；10XPCRbuffer如1；Taq酶(0.5_)0.3W；Primer(0,8Pmol/W)4W;MgCl2(25mmol/L)1.8W；dNTPs(dATP、dCTP、dTTP、dGTP各含1.ONmol/W)0.6rt。2.隨機(jī)引物P15、U7、U10和X3四個引物對24

3、種杜鵑花屬(RhododendronL.)植物擴(kuò)增的條帶在10?15之間，多態(tài)性條帶在9?14條之間，平均每條引物擴(kuò)增出12條帶；引物U10是擴(kuò)增出多態(tài)性最多的引物，多態(tài)性占93.33%。3.用4個隨機(jī)引物對24種杜鵑花屬植物進(jìn)行RAPD擴(kuò)增，所得產(chǎn)物顯示了豐富的多態(tài)性，表明杜鵑花屬植物種間遺傳基礎(chǔ)相當(dāng)復(fù)雜；對RAPD產(chǎn)物進(jìn)行統(tǒng)計的相似系數(shù)分析和聚類分析結(jié)果同形態(tài)分類學(xué)基本吻合，說明RAPD技術(shù)在杜鵑花屬楦物種間劃分和鑒定上有很髙的靈敏性和準(zhǔn)確性?？偟膩碚f，利用RAPD技術(shù)可以為杜鵑花屬植物的系統(tǒng)演化和劃分研究提供幫助。關(guān)鍵詞：杜鵑花屬;RAPD;聚類

4、分析;遺傳多樣性AbstractThereactionCondiactionsfortheRandomlyAmplifiedPolymorphicDNA(RAPD)analysisforRhododendronhavebeenoptimizedandanalyzedtheGeneticRelationshipsAmong24RhododendronusingRAPDmarkers.Fourout60randomprimerswereselectedwhichproducteddistinctbands,showingunmistakablepolymo

5、rphism.ByNTSY-PCprogram,Jaccard’sgeneticsimilaritycoefficientsweregeneratedanddendromgramwasconstructedusingUMPGA.Theresultswereasfellow:1)ThePCRproductswerestablewhenthePCRwas45cyclesofpredenatureat95°Cfor1minutes,denature94#C1minutes,annealing34*C1minutes,extension72#C2minutes

6、.Finally,itextenst725minutes,andstoredat4°C.Theamplificationsolution(20fil)wasconsistedofdNTPs0.6^il,lO^PCRbuffer2)il,MgCb(25mmol/L)1.8^1,TaqDNApolymerase(0.5U/^I)0.3

7、il,Primer(0.8Pm/nl)4^l,templateDNA(lOng/pl)12)Thepolymorphismanalysisshowedatotalof48bands,amongwhich44werepolym

8、oiphic.Perprimerproducted12bands,including11polymorphicbands.PrimerU10attainedthemostpolymoiphicbandsamongthefourprimers,polymorphicratereach93.33%.3)ThePCRproductsusingthefourrandomprimersamplified24accessionDNAofRhododendronshowedthecomplexgeneticbaseintheGeneticRelationships.

9、Theclusteringresultsaccordingtogeneticsimilarit