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1、川西南13種報春花屬植物的RAPD分析摘要本文以采自四川西南山區(qū)的龍池、康定、木格措以及理塘等地的13種報春花植物為供試材料，利用隨機擴增多態(tài)性DNA(RAPD)技術分析了其遺傳多樣性和親緣關系，對雅江報春(P．yargongensis)、雜色鐘花報春(P．a(chǎn)lpicola)及四川特有種青城報春(P．chienii)進行了評價，分析了偏花報春(P．secundiflora)的系統(tǒng)地位，同時探討了影響報春花遺傳多樣性的因素，并提出了相應的保護策略及今后的研究方向。主要結果如下：1、建立了適用于報春花RAPD反應的優(yōu)化程序和反應體系。其中最適
2、反應體系為：lOxBuffer(含Mg+)2pl，dNTP150I_tmoFL，Taq酶O．4肛l，DNA模板30～401ag／lal，引物2．5p．mol／L。最適PCR反應程序為：95。C預變性5min，94℃變性30s，35。C復性50s，72℃延伸90s，共進行40個循環(huán)，最后一個循環(huán)在72℃保持5min。2、13種報春花共85份材料的RAPD分析結果表明，28條引物共擴增出250條DNA帶紋，其中多態(tài)性帶達209條，占總數(shù)的83．6％，報春花種間遺傳多樣性很高。其中雅江報春擴增出173條DNA帶，有82條為多態(tài)性帶紋，占47．4
3、％；雜色鐘花報春擴增出206條帶，其中155條為多態(tài)性帶紋，占75．2％；青城報春擴增出187條帶，其中94條為多態(tài)性帶紋，占50．3％。3、雅江報春17份材料的遺傳距離變幅為0．0345～0．9523，材料間平均遺傳距離為0．4584。在居群內(nèi)，木格措居群材料間平均遺傳距離較大，遺傳多樣性較高，材料聞存在較大的遺傳分化，而康定和理塘居群內(nèi)材料間遺傳距離較小，遺傳分化也較小，因此遺傳多樣性較低；在居群間，木格措居群與康定居群的平均遺傳距離相對最小，表明兩個居群間的親緣關系較近；而康定居群和理塘居群的平均遺傳距離相對較遠，說明兩個居群間差異
4、較大，親緣關系較遠。居群間的遺傳分化隨居群間地理距離的增大而加大。4、雜色鐘花報春不同花色的植株之間具有明顯的遺傳變異，藍花植株不同個體間的遺傳分化更大，遺傳差異更為明顯。青城報春居群內(nèi)遺傳分化較小，遺傳多樣性較低，這也是導致其分布范圍相對狹窄，僅見于都江堰地區(qū)的原因。5、不同生境及生態(tài)地理區(qū)域?qū)蟠夯ㄟz傳多樣性的影響較大，發(fā)育良好的生境有利于提高報春花的遺傳多樣性；同一區(qū)域內(nèi)高水平、穩(wěn)定的基因流有利于使報春花居群趨于一致。川西盆地龍池的報春花材料基本聚為一類，明顯區(qū)別于采自甘孜州的材料，采自甘孜州的報春花材料問的遺傳差異較之于龍池地區(qū)的
5、材料差異明顯，遺傳多樣性更高。6、基于RAPD標記聚類分析與形態(tài)學分類有部分類似。在形態(tài)學分類上屬于燈臺報春組的粉被燈臺報春沒有與另外兩種同組報春(桔紅燈臺報春、偏花報春)聚在一起，而是與同為龍池地區(qū)的材料聚類，說明生態(tài)地理類型對報春花遺傳結構具有明顯的影響作用。同時對偏花報春的系統(tǒng)地位進行了探討，認為偏花報春與燈臺報春組的材料聚為一類，表明其與燈臺報春組具有更近的親緣關系。關鍵詞：報春花RAPD親緣關系遺傳多樣性川西南★基金項目：四川省教育廳資助項目2005A02AbstractTheRAPD(randomlyamplifiedpoly
6、morphicDNA)markerwasappliedtostudyingthegeneticdiversityandphylogeneticrelationshipamongthirteenPrimulaspeciesinsouthwesternareasofSichuanprovince，suchasLongchi，Kangding,MugecuoandLitang．P．．yargongensis、e．a(chǎn)tpicolaandtheendemicspeciesofSichuan--P．chieniiwereevaluatedforthe
7、firsttime，andthephylogenystatusofPsecundifloraWasanalyzed．Meanwhile，effectfactorsofthegeneticdiversityinPrimulawerediscussed，andcorrespondingprotectionstrategiesandresearchdirectionsinthefutureweresuggested．11地resultsindicatedthat：lOptimizedmethodandreactionsystemofRAPDin
8、Primulawereestablished．Theoptimumreactionsystemwereasfollows：10xBuffer(includingM礦)2pl，dNTP150pm
