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1、速效救心丸通過肥大細(xì)胞促進(jìn)胎鼠宮內(nèi)發(fā)育的作用李秀富1,2,高登慧2,姚紅艷2,歐德淵2(1.銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院,貴州銅仁554300;2.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,貴陽550025)摘要:為探討速效救心丸(QAHR)通過肥大細(xì)胞及其主要介質(zhì)促進(jìn)宮內(nèi)胎兒生長(zhǎng)發(fā)育的作用,將140只雌性小鼠隨機(jī)分正常對(duì)照組、速效救心丸250mg/kg、500mg/kg和750mg/kg給藥組。當(dāng)小鼠妊娠至16d時(shí)脫頸椎處死小鼠,對(duì)其子宮組織分別進(jìn)行組胺(HA)含量和一氧化氮合酶(NOS)活力測(cè)定,子宮肥大細(xì)胞(MC)、肝素陽性細(xì)胞顯色及微血管密度(MVD)測(cè)定。結(jié)果表明,50
2、0mg/kg和750mg/kg的速效救心丸給藥組小鼠子宮MC數(shù)、肝素陽性細(xì)胞數(shù)、子宮MVD和NOS活力較對(duì)照組顯著(P<0.05)升高,而子宮HA含量顯著(P<0.05)低于對(duì)照組。提示速效救心丸可能通過增加小鼠子宮組織內(nèi)MC數(shù)量及其主要介質(zhì)的釋放,改善血液循環(huán)和促進(jìn)微血管生成,從而促進(jìn)宮內(nèi)胎兒的生長(zhǎng)發(fā)育。.jyqkg/kg的量拌飼QAHR),小鼠均自由采食飲水,飼養(yǎng)室溫光條件與環(huán)境一致。預(yù)飼1周后,按雌雄比例2∶1配種,當(dāng)晚將雄鼠放進(jìn)雌鼠籠內(nèi),次日早晨檢查母鼠,若有陰栓的判定為懷孕第一天。妊娠至第15天時(shí)禁食24h,脫頸椎處死母鼠,用吸水紙吸取多
3、余的水分后分別測(cè)每組胎仔數(shù),用電子天平測(cè)每個(gè)胎仔重、子宮胎盤重,IUGR數(shù)(即低于正常胎鼠平均體重10%的胎鼠數(shù));用熒光光度法測(cè)子宮組胺(HA)含量;NOS試劑盒測(cè)子宮組織NOS活力;Carnoy’s固定,甲苯胺藍(lán)染色(Toluidineblue,TB)顯示MC;NBF固定,吖啶橙(Acridine-Orange,AO)顯示子宮肝素陽性細(xì)胞;CD34試劑盒進(jìn)行微血管密度(Microvesseldensity,MVD)顯色。1.3數(shù)據(jù)處理各組試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示,用SPSS13.0軟件中One-wayANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2結(jié)果與分析2
4、.1小鼠胚胎生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)測(cè)定結(jié)果由表1可見,500mg/kg和750mg/kgQAHR組平均胎仔重較對(duì)照組顯著(P<0.05)增加;子宮胎盤重隨拌飼的QAHR劑量升高而增高,且750mg/kgQAHR組較對(duì)照組顯著(P<0.05)增加;750mg/kgQAHR組胎仔數(shù)較對(duì)照組顯著(P<0.05)增加;500mg/kg和750mg/kgQAHR組IUGR數(shù)較對(duì)照組顯著(P<0.05)減少。而250mg/kgQAHR組與對(duì)照組相比各項(xiàng)指標(biāo)差異均不顯著。2.2小鼠子宮MC和肝素陽性細(xì)胞的分布經(jīng)TB與AO染色的切片觀察,孕小鼠子宮MC及肝素陽性細(xì)胞均主要分
5、布于肌層近血管處,外膜中較少,內(nèi)膜內(nèi)極少(圖1~5);由表2可見,500mg/kg和750mg/kgQAHR組小鼠子宮MC及肝素陽性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組均顯著(P<0.05)增加,250mg/kgQAHR組小鼠子宮MC及肝素陽性細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組相比差異不顯著。2.3小鼠子宮HA含量與NOS活力測(cè)定由表3可見,500mg/kg和750mg/kgQAHR組小鼠子宮HA含量較對(duì)照組顯著(P<0.05)降低,而子宮組織NOS活力較對(duì)照組顯著(P<0.05)升高,250mg/kgQAHR組小鼠子宮HA含量和NOS活力與對(duì)照組相比差異不顯著。2.4子宮微血管的分布CD
6、34具有染色強(qiáng)、背景清晰、易計(jì)數(shù)的特點(diǎn)。陽性細(xì)胞呈棕黃色條索狀排列,廣泛分布于子宮組織的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞,許多含有多層平滑肌成分的厚壁大腔血管內(nèi)皮細(xì)胞同時(shí)也著色(圖6~8)。由表4可見,500mg/kg和750mg/kgQAHR組小鼠子宮MVD較對(duì)照組顯著(P<0.05)增多,而250mg/kgQAHR組小鼠子宮MVD與對(duì)照組相比差異不顯著。3小結(jié)與討論3.1QAHR對(duì)孕鼠子宮MC及其主要介質(zhì)的影響子宮內(nèi)MC的研究是生殖學(xué)的重要內(nèi)容[4],其釋放的活性介質(zhì)HA具有舒張血管平滑肌和松弛子宮平滑肌的作用,HP有改善低氧血癥和微循環(huán)等作用[5],NO有舒
7、張血管和降低血管阻力的作用,而且還有促血管生成的作用[6]。本試驗(yàn)中,AO染色顯示的小鼠子宮肝素陽性細(xì)胞與TB染色顯示的MC形態(tài)與分布十分相似,主要分布于肌層近血管處,外膜中較少,內(nèi)膜中極少而不易看見,形態(tài)多樣,大小不一,胞漿內(nèi)有大小不等的顆粒。MC和肝素陽性細(xì)胞在數(shù)量上隨QAHR呈劑量依賴性升高,肝素是MC合成和分泌的主要介質(zhì)[7],NOS是調(diào)節(jié)內(nèi)源性NO產(chǎn)生的關(guān)鍵因素[8]。本試驗(yàn)中小鼠子宮、胎盤HA隨QAHR劑量的升高而降低,NOS活力隨QAHR劑量的升高而升高。且本試驗(yàn)中小鼠胚胎生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)指標(biāo)隨QAHR添加劑量的升高均有升高,IUGR數(shù)減
8、少。綜合分析認(rèn)為可能是QAHR促進(jìn)孕鼠子宮MC調(diào)控其主要介質(zhì)釋放共同調(diào)節(jié)孕鼠子宮微血管生成、改善低氧血癥、改善微循環(huán)、促進(jìn)