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《三氧化二砷與刺五加合用誘導hela細胞凋亡的實驗》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、三氧化二砷與刺五加合用誘導HeLa細胞凋亡的實驗【關鍵詞】三氧化二砷；,,刺五加；,,HeLa細胞；,,凋亡 摘要：目的探討三氧化二砷與刺五加合用對癌細胞生長的抑制作用及其機理。方法以HeLa細胞的生長抑制情況，流式細胞儀PI單染法檢測藥物誘導細胞的凋亡狀況。結果兩藥合用24h組細胞變小變圓，脫落情況都較其他組明顯，該組細胞生長抑制率明顯高于單用組，合用24h組細胞的凋亡率明顯高于合用16h和8h組（P＜0.01）。結論刺五加可以作為三氧化二砷的抗癌增效劑，兩藥合用有很強的抗癌活性，其作用機理與抑制癌細胞生長、誘導其凋亡有關?！ ￡P鍵詞：三氧化二砷；刺五加；HeLa
2、細胞；凋亡 ExperimentalStudyontheApoptosisofHeLaCellsInducedbyArsenicTrioxideandacanthopanaxsenticosus Abstract:ObjectiveToinvestigatetheanti-tumoreffectofArsenictrioxideandAcanthopanaxSenticosusoncarcinomacellsanditsprobablemechanism.MethodsHeLacellsodel.HeLacellsstructuralchangeinedbyinv
3、ertedphasemicroscope.Theinhibitioneffectonthegroicroculturetetrazoliumassay(MTT).Theapoptosisofcellsetry(FCM).ResultsThecellsofthegroupoftedicinesusedtogetherturnedsmallerandrounderthanothergroups.Thegroedicinesusedtogether24hoursprovetheantitumoreffectsofArsenictrioxide,butorestudying.
4、 Keyl/支，黑龍江省珍寶島制藥有限公司）；亞砷酸注射液（規(guī)格10mg/10ml,哈爾濱伊達藥業(yè)有限公司）；四甲基偶氮唑鹽（MTT,Amresco公司）；RPMI1640培養(yǎng)基（美國GIBCO公司）；新生牛血清（杭州四季青生物制品公司）；酶標儀（560型，美國BIORAD公司），流式細胞儀（FACScalibur型，美國BD公司）；數(shù)碼相機（日本Canon公司）?！ ?.2細胞系HeLa細胞，為人宮頸癌細胞系，購自武漢大學中國典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC）?！ ?.3藥用濃度的確定 1.3.1刺五加藥用濃度的確定采用MTT法，取對數(shù)生長期HeLa細胞，1×10
5、5/ml的細胞100μl至96孔培養(yǎng)板，加入等量不同濃度的刺加五溶液，使各組終濃度分別為0.1，0.5，1，1.5mg/ml，每個濃度組和對照組均設5個重復孔，以加細胞而不加藥物組為空白對照組。37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h后，取出培養(yǎng)板，棄舊培養(yǎng)液，每孔加入5mg/ml的MTT溶液20μl，37℃繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄培養(yǎng)液，每孔加入DMSO150μl，振蕩15min，使結晶物充分溶解，最后在酶標儀上用490nm波長測定各孔的OD值，計算細胞存活率和半數(shù)抑制濃度（IC50），從而確定刺五加的用藥濃度為0.5mg/ml?！ ?.3.2As2O3藥用濃度的確定PBS重懸細
6、胞。離心5min去PBS，每管加入1mlPI染液，室溫避光反應30min。制備好的細胞懸液經(jīng)300目尼龍篩網(wǎng)過濾后立即在流式細胞儀上檢測，CELLQuest軟件獲取并分析檢測數(shù)據(jù)?！ ?.6細胞形態(tài)學觀察按上述方法分別讓藥物作用細胞8，16，24h，然后在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化，并用數(shù)碼相機照相記錄結果?！ ?結果 2.1細胞生長抑制率刺五加與As2O3合用對HeLa細胞增殖有顯著的抑制作用。結果見表1?！ ”?藥物對HeLa細胞的生長抑制率(略) c與b比較，P＜0.01，c與a比較，P＜0.01 2.2HeLa細胞的凋亡分別觀察藥物作用HeLa細胞8，
7、16，24h的凋亡情況，結果顯示兩藥合用能明顯誘導HeLa細胞凋亡，且有明顯的時間依賴性（見表2），合用16，24h流式檢測出現(xiàn)明顯的凋亡峰。見圖1?！ 對照組流式b兩藥合用24h凋亡c兩藥合用16h凋亡 圖1刺五加與As2O3合用誘導HeLaxl細胞凋亡的流式檢測圖(略) 表2藥物作用HeLa細胞不同時間的細胞凋亡率(略) c與相對應時間a，b各組認及生理鹽水組比較，P＜0.01；c24與c8，c16比較P＜0.01；b與相對時間a組和生鹽鹽組比較，P＜0.05 3討論 細胞凋亡（apoptosis）是機體中普遍存在的重要的生物學事件，
