三氧化二砷誘導(dǎo)子宮頸癌hela細(xì)胞凋亡的初步研究

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1、三氧化二砷誘導(dǎo)子宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡的初步研究【關(guān)鍵詞】子宮頸癌摘要:目的：研究三氧化二砷（As2O3）誘導(dǎo)子宮頸癌細(xì)胞系HeLa細(xì)胞凋亡，探討As2O3對(duì)子宮頸癌的臨床應(yīng)用意義。方法：采用四甲基偶氮唑鹽比色（MTT）法檢測(cè)濃度分別為1.0、2.0、5.0、10.0μmol/L的As2O3作用1、2、3、4d后HeLa細(xì)胞的存活率，并進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察；采用細(xì)胞凋亡原位檢測(cè)(TUNEL)法進(jìn)行細(xì)胞凋亡的檢測(cè)。結(jié)果：2.0μmol/LAs2O3處理HeLa細(xì)胞48h后,可見(jiàn)細(xì)胞的存活率明顯降低(P<0.05)，處理96h后，細(xì)胞的存活

2、率進(jìn)一步降低(P<0.01)，經(jīng)5.0μmol/LAs2O3處理的HeLa細(xì)胞24h后就明顯可見(jiàn)細(xì)胞的存活率降低；As2O3作用后，HeLa細(xì)胞具有明顯的凋亡特征性改變；TUNEL法檢測(cè)可發(fā)現(xiàn)HeLa細(xì)胞有DNA的斷裂。結(jié)論：As2O3可以誘導(dǎo)子宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖，隨著As2O3濃度增加，作用時(shí)間延長(zhǎng)，效果越明顯，其作用具有濃度和時(shí)間依賴性。關(guān)鍵詞：三氧化二砷；子宮頸癌；HeLa細(xì)胞；細(xì)胞凋亡Theprimarystudyonprogrammedcelldeathofhumanuterincervicalcanc

3、erinducedbyarsenictrioxideYANGXu,Lalai,LUXiaomei,etal（DepartmentofPathology，XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830054，China）Abstract：Objective：Toinvestigatetheprogrammedcelldeathofhumanuterincervicalcancerinducedbyarsenictrioxide(As2O3)andresearchthearsenictrioxidesignif

4、icanceofclinicalapplication.Methods：Morphlogyinvestigation,MTTreductionassayandinsitucelldeathdetection(TdTmediateDutpnicklabeling,TUNEL)wereadopted.Results：ThesurvivalofHeLacelllinewasinhibitedbyAs2O3.Andatypicalapoptoticmorphlogyalsocouldbeseenduringthecellstreatedw

5、ithAs2O3.MoreoverDNAfragmentationcouldbedetectedbyTUNEL.Conclusion：As2O3caninduceprogrammedcelldeathofHeLacellsandinhibitthecellularproliferation.Theeffectshowstimeandconcentrationdependence.Keywords:arsenictrioxide;cervicalcancer;HeLacells;programmedcelldeath有關(guān)研究表明，三

6、氧化二砷(As2O3)治療急性早幼粒細(xì)胞性白血?。ˋPL）具有良好的療效，并且對(duì)全反式維甲酸耐藥的患者也有效，國(guó)內(nèi)外已將其用于許多血液系統(tǒng)腫瘤的治療，其主要機(jī)制是誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡［1,2］，但As2O3對(duì)實(shí)體瘤的作用尚在進(jìn)一步的探討中。子宮頸癌為實(shí)體瘤，是一種常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤，目前治療以手術(shù)為主，但根治術(shù)的5年生存率較低，子宮頸癌對(duì)放療的敏感性具有個(gè)體差異，且放療后易出現(xiàn)局部轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，因此尋找有效的子宮頸癌化療藥物具有重要意義。本文研究了As2O3對(duì)人子宮頸癌HeLa細(xì)胞體外作用的研究，為尋找新的有效治療子宮頸癌的藥物提供理論

7、依據(jù)。1材料與方法1.1試劑As2O3(美國(guó)Sigma公司)，用超純水配成1mmol/L的儲(chǔ)備液，保存于4℃冰箱中，使用前用培養(yǎng)基稀釋至所需濃度；細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(德國(guó)BoehringerMannheim公司)；四甲基偶氮唑鹽(MTT，美國(guó)Sigma公司)，以PBS配制成5mg/ml儲(chǔ)備液，于4℃避光保存，工作液濃度0.5mg/ml；DMEM培養(yǎng)基及胎牛血清(FCS，美國(guó)Gibco/BRL公司)。1.2細(xì)胞培養(yǎng)人子宮頸癌HeLa細(xì)胞系(中科院上海細(xì)胞所)接種于DMEM培養(yǎng)基(含10%的胎牛血清、100U/ml青霉素、100mg/

8、ml鏈霉素、2mol/L的谷氨酰胺)，在37℃、飽和濕度為5%的CO2恒溫箱里培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞。1.3細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察每瓶（10cm2）接種2×105個(gè)細(xì)胞，24h后用不同濃度（1.0、2.0、5.0、10.0μmol/L）的As2O3(