正交試驗優(yōu)選腫節(jié)風(fēng)的提取工藝

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1、正交試驗優(yōu)選腫節(jié)風(fēng)的提取工藝【關(guān)鍵詞】正交試驗；腫節(jié)風(fēng)；提取工藝；異嗪皮啶；總黃酮Abstract:ObjectiveTooptimizetheextractionprocedureofSarcandraglabra．MethodsThecontentsofisofraxidinandtotalflavonoidsinedbyHPLCandUVspectrophotometry,respectively.Extractionprocedureizedbyorthogonaltest．ResultsTheoptimalex

2、tractionconditionsethodhashighextractionefficiency，andcouldbeusedforscaleup.Keyb.)Nakai的干燥全草，又名九節(jié)茶、接骨草、草珊瑚，其味苦、辛，性平，具清熱涼血、活血消斑、祛風(fēng)通絡(luò)等功效［1］，主要含有異嗪皮啶(isofraxidin)等香豆素類化合物及落新婦苷(astilbin)等黃酮類成分［2］，主產(chǎn)于廣東、廣西、江西等地，《中國藥典》2005年版一部將其收載為正品藥材。本文以高效液相色譜法測定腫節(jié)風(fēng)提取液中異嗪皮啶的含量，以紫外分光

3、光度法測定總黃酮的含量，應(yīng)用多指標(biāo)綜合評分法對正交試驗結(jié)果進行分析，為腫節(jié)風(fēng)相關(guān)制劑的研究開發(fā)提供參考。1儀器與材料1.1儀器Dionexultimate3000高效液相色譜儀（光電二極管陣列檢測器、Chromeleon色譜工作站）；BS224S型電子分析天平（北京Sartorius）；UV1101型紫外分光光度計(上海天美科學(xué)儀器有限公司)。1.2材料蘆丁對照品（批號：100080200306，含量測定用）、異嗪皮啶對照品（批號：110837200304含量測定用），均購于中國藥品生物制品檢定所；腫節(jié)風(fēng)藥材：購于廣

4、州致信藥業(yè)有限公司，經(jīng)鑒定符合《中國藥典》2005年版一部腫節(jié)風(fēng)項下標(biāo)準(zhǔn)；甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑為分析純。2方法與結(jié)果2.1正交試驗設(shè)計　　依據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，以乙醇濃度、乙醇用量、提取時間和提取次數(shù)為考察因素，每因素設(shè)3個水平，采用L9（34）正交試驗表安排試驗（見表1）。表1因素水平表表2正交試驗結(jié)果2.2異嗪皮啶含量測定2.2.1色譜條件色譜柱：KromasilC18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈0.2%磷酸溶液（體積比20∶80）；檢測波長：344nm；柱溫：30℃；流速：1.0mL/min

5、；進樣量：20μL。2.2.2對照品溶液的制備精密稱取異嗪皮啶對照品0.0105g，用甲醇溶解并定容至10mL量瓶中，精密吸取2mL，用甲醇定容至50mL，得質(zhì)量濃度為0.042mg/mL的對照品儲備溶液。2.2.3供試品溶液的制備稱取腫節(jié)風(fēng)藥材20g，置500mL的圓底燒瓶中，按表2條件提取，濾過，分別定容至500mL量瓶中，作為樣品溶液。精密量取樣品溶液25mL，用提取溶劑分別定容至50mL，精密吸取5mL，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至10mL，用0.45μm的微孔濾膜濾過，即得。2.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的

6、制備精密吸取異嗪皮啶對照品儲備溶液1、2、3、5、10、15mL，置25mL量瓶中，加甲醇定容，用0.45μm的微孔濾膜濾過，精密吸取20μL注入液相色譜儀，按上述條件測定異嗪皮啶吸收峰峰面積，以異嗪皮啶微克數(shù)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y＝948.96X+0.02，r=0.9999，表明異嗪皮啶進樣量在0.0336～0.504μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。2.2.5含量測定精密吸取供試品溶液、對照品溶液各20μL，注入液相色譜儀，測定異嗪皮啶峰面積，計算異嗪皮啶含量。2.3總黃酮

7、含量測定［3］2.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取蘆丁對照品20.8mg，置100mL量瓶中，加體積分?jǐn)?shù)為60％的乙醇溶解并定容至刻度，分別精密吸取0、2、3、4、5、6、7mL，置25mL量瓶中，分別加體積分?jǐn)?shù)為60％的乙醇補足至7mL，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％亞硝酸鈉1.0mL，搖勻，靜置6min，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％硝酸鋁1.0mL，搖勻，靜置6min，再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4％的氫氧化鈉10.0mL，用體積分?jǐn)?shù)為60％的乙醇定容至25mL，搖勻，靜置10min后，用可見－紫外分光光度計于510nm處測吸光度。以蘆丁對照品的濃度為

8、橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：2.3.3含量測定精密吸取供試品溶液2mL置25mL量瓶中，按“2.3.1”項下方法操作，測定吸光度值，計算樣品中總黃酮的含量。2.4正交試驗結(jié)果及分析按異嗪皮啶含量和總黃酮含量各占50％的權(quán)重綜合評分，對正交試驗結(jié)果進行極差和方差分析，試驗結(jié)果見表2。從結(jié)果可知，因