hplc 法測(cè)定消渴丸中格列本脲的含量

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1、HPLC法測(cè)定消渴丸中格列本脲的含量【關(guān)鍵詞】HPLC消渴丸格列本脲含量測(cè)定消渴丸是由葛根地黃等7味中藥及西藥格列本脲制成。成功為滋腎養(yǎng)陰，益氣生津。用于治療糖尿病。格列本脲是降糖的主要有效成分。且格列本脲有許多不良反應(yīng)，所以筆者建立了高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定消渴丸中格列本脲的方法，以控制格列本脲的含量，保證藥品質(zhì)量及用藥安全。1儀器與試藥Angilent—110型高校液相色譜儀(美國(guó)Angilent公司)，UV—2500型可見—紫外分光光度計(jì)(日本島津公司)，消渴丸(市售品批號(hào)H00390H00214)，甲醇(色譜純)，格列本脲對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制

2、品簽定所，批號(hào)0135—0103)，其余試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1色譜條件DiamondC18色譜柱(4.5mm×150mm,5μg);柱溫：30℃;流動(dòng)相：甲醇—磷酸二氫氨溶液(磷酸二氫銨1.725g，容于300mL水，磷酸調(diào)pH3.5±0.5(65:35);流速：1.0mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：274nm;進(jìn)樣量：5μL。2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取格列本脲對(duì)照品10mg，置50mL量瓶中，加甲醇20mL超聲處理使溶解，加甲醇至刻度，搖勻。精密量取10mL置50mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即可。濃度40μg/mL。2.3供試品溶液的制備以1

3、0丸為1份，共稱10份，算出每份的平均重量(10丸的重量)取本品研成細(xì)粉，取10丸(約相當(dāng)于格列本脲2.5mg)，精密稱定，置具塞燒瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲處理30min，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，取得。2.4陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例及制備方法，自制格列本脲的陰性樣品，按2.3項(xiàng)下的方法制備硬性對(duì)照溶液。按以上色譜條件得到對(duì)照品，消渴丸及陰性對(duì)照的色譜圖，表明樣品與對(duì)照的保留的時(shí)間相同，陰性對(duì)照溶液。按以上色譜條件得到對(duì)照品，消渴丸及陰性對(duì)照色譜圖，表明樣品與對(duì)照品的保留時(shí)間相同，陰性對(duì)照無(wú)干擾。2.5線性

4、關(guān)系精密吸取格列本脲40μgmL-1對(duì)照品溶液2、4、6、8、10μL按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=156.45X—0.4313，r=0.9999。格列本脲在0.08～0.40μg范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。2.6精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取格列本脲對(duì)照品溶液(40μg/mL)10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定格列本脲峰面積為62.573，RSD=0.30%(n=6)。2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同批共試品(批號(hào)H00390)5份，照“樣品測(cè)定”項(xiàng)下操作，測(cè)定格列本脲含量，RSD=0.92%(n=5)。2.8穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取對(duì)照

5、品溶液，在實(shí)驗(yàn)室中室溫放置，分別在0、5、10、15、20、24h進(jìn)樣，對(duì)照品的峰面積RSD=0.92%(n=5),溶液在在24h內(nèi)穩(wěn)定。2.9回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取已知含量的消渴丸(批號(hào)H00390，含量1.9mg/mL)細(xì)粉(約相當(dāng)于格列本脲1.25mg)9份，分為3組，每組分別精密加入對(duì)照品溶液(濃度為1.0mg/mL)1.0mL、1.25mL、1.5mL照“樣品測(cè)定”項(xiàng)以下操作，計(jì)算加樣回收率平均回收率97.19%，RSD1.85%。見表1。表1回收率試驗(yàn)結(jié)果(略)2.10樣品的測(cè)定取3批消渴丸，按“供試品溶液”項(xiàng)下制備溶液，同法操作，即得。見表2。表2

6、樣品的含量測(cè)定結(jié)果(略)【