hplc法測定鹽酸多巴胺注射液的有關(guān)物質(zhì)論文

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1、HPLC法測定鹽酸多巴胺注射液的有關(guān)物質(zhì)論文【摘要】目的篩選合適的高效液相色譜條件，測定鹽酸多巴胺注射液的有關(guān)物質(zhì)。方法采用不加校正因子的主成分自身對照法，采用RPHPLC；色譜柱為DiamonsilC18（4.6mm×150mm，5μm）；流動(dòng)相為［0.005mol/mL十二烷基硫酸鈉冰醋酸0.1mol/mL乙二胺四醋酸二鈉(700∶10∶2)］乙腈(6∶4)；柱溫：40℃；流速：1.20mL/min；檢測波長280nm。結(jié)果在1～12μg/mL范圍內(nèi)線性良好，測定標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=36493X-629.88（r=0.9996，n=11）；最低檢測限為0.9997ng

2、。結(jié)論該法專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確，靈敏.freelinehydrochloride）注射液的有關(guān)物質(zhì)檢查，中國藥典［1］中并沒有收載。英國藥典中收載的滅菌多巴胺濃溶液和注射用鹽酸多巴胺采用薄層色譜法，需用鹽酸甲基多巴胺對照品（4Omethyldopaminehydrochloride和3Omethyldopaminehydrochloride）測定系統(tǒng)適用性［2］。本文采用HPLC法進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查，方法準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，靈敏度高，可作為本品的有關(guān)物質(zhì)檢查方法，更有效的對其進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控。1儀器與試藥TU1901型紫外可見分光光度計(jì)，美國adzuLC10Avp高效液相色譜儀。

3、甲醇、冰醋酸、十二烷基硫酸鈉和乙二胺四醋酸二鈉均為分析純試劑。鹽酸多巴胺注射液由廣州白云山明興制藥有限公司提供，批號為050107，050501，060703。2色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相：［0.005mol/mL十二烷基硫酸鈉冰醋酸0.1mol/mL乙二胺四醋酸二鈉(700∶10∶2)］乙腈(6∶4)；流速：1.2mL/min；檢測波長280nm；理論板數(shù)按鹽酸多巴胺峰計(jì)算為3600。在以上色譜條件下，鹽酸多巴胺保留時(shí)間約為5min，見圖1。A.酸性破壞試驗(yàn)B.堿性破壞試驗(yàn)C.加熱破壞試驗(yàn)D.氧化破壞試驗(yàn)E.光照破壞試驗(yàn)F.溶解介質(zhì)氧化破壞試驗(yàn)G

4、.溶解介質(zhì)堿性破壞試驗(yàn)圖1鹽酸多巴胺降解產(chǎn)物色譜圖（略）Fig.1HPLCchromatogramsofdepositionproductsofdopaminehydrochloride3方法與結(jié)果3.1方法的專屬性考察取鹽酸多巴胺對照品適量，用流動(dòng)相制成每1mL中含300μg的溶液，取5mL置試管中，加熱30min進(jìn)行加熱破壞試驗(yàn)；取5mL置試管中，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的鹽酸溶液2滴，加熱30min后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的NaOH溶液調(diào)為中性作為酸性破壞試驗(yàn)；取5mL置試管中，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的NaOH溶液2滴，加熱30min后加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%鹽酸溶液調(diào)為中性作為堿性破壞

5、試驗(yàn)；取5mL置試管中，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的過氧化氫2滴，加熱30min作為氧化破壞試驗(yàn)；取5mL置試管中，在紫外燈366nm下光照1h作為光照破壞試驗(yàn)；同時(shí)做溶解介質(zhì)的破壞性試驗(yàn)。各取上述溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果酸性和堿性對鹽酸多巴胺有明顯的破壞，溶解介質(zhì)約在1.1min和1.4min有雜質(zhì)峰，擬定的色譜條件對分解產(chǎn)物與主峰有良好的分離，表明方法的專屬性強(qiáng)，見圖1。3.2方法的耐用性考察選用DiamonsilC18（4.6mm×150mm，5μm）、江蘇漢邦C18（4.6mm×250mm，5μm）、AlltechC18（4.6mm×150mm，5μm）

6、色譜柱等3種不同品牌不同填料的C18色譜柱，取破壞性溶液進(jìn)樣，結(jié)果3種色譜柱對分解產(chǎn)物與主峰均能達(dá)到有效分離。3.3線性范圍精密稱取鹽酸多巴胺對照品適量，用流動(dòng)相溶解并稀釋成每1mL含1～12μg的11個(gè)溶液，依法測定，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，求得回歸方程：Y=36493X-629.88（r=0.9996，n=11）。鹽酸鹽多巴胺在1～12μg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。3.4檢測限按上述色譜條件，以信噪比為3∶1對檢出限進(jìn)行測定，測得鹽酸多巴胺在此條件下的檢出限為0.9997ng。3.5供試品的測定精密量取本品適量，加流動(dòng)相稀釋成每1mL中含300

7、μg的溶液作為供試品溶液；精密量取1mL，置50mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，作為對照溶液。量取對照溶液20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，鹽酸多巴胺峰的保留時(shí)間約在5min，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分峰的峰高為記錄儀滿量程的20％～25％。再精密量取供試品溶液與對照溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至鹽酸多巴胺保留時(shí)間的3倍。供試品溶色譜圖見圖2，檢驗(yàn)結(jié)果見表1。A.空白溶劑B.1%對照溶液C.樣品圖2鹽酸多巴胺注射液有關(guān)物質(zhì)檢查色譜圖（略）Fig.2HPLCchromatogramsofdopa