hplc法測定甲腫消及大鼠血清中土貝母苷甲的含量論文

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1、HPLC法測定甲腫消及大鼠血清中土貝母苷甲的含量論文.freelL,200mg,60μm)處理,甲醇洗脫；色譜柱：DiamonsilC18(250mm×4.6mm,5μm)和Easyguard保護(hù)柱；流動相：甲醇-水(65∶35),檢測波長：214nm,流速：1mL/min。結(jié)果甲腫消制劑及大鼠血清中土貝母苷甲的回收率分別為(103.49±3.49)%、(104.70±4.69)%,土貝母苷甲在1.18～88.5μg/mL濃度范圍內(nèi)線性良好。每1g制劑含土貝母苷甲995.3μg,.freelL。結(jié)論本方法快速、簡便、準(zhǔn)確,可用于測

2、定制劑及其血清中土貝母苷甲的含量。【關(guān)鍵詞】甲腫消；土貝母苷甲；固相萃?。环聪喔咝б合嗌V法；含藥血清；含量測定KeyosideⅠ；SPE；RP-HPLC；drugcontainingserum；determination甲腫消處方由夏枯草、土貝母等組成,按適當(dāng)工藝制成濃度為3g/mL原藥材的浸膏劑。動物和臨床試驗(yàn)證明,該制劑具有較好的化痰散結(jié)、治療甲狀腺功能亢進(jìn)型甲狀腺腫大的作用。但其作用途徑與機(jī)理尚不清楚,故我們采用血清藥理學(xué)的方法,觀察本制劑大鼠灌胃給藥后的含藥血清對甲狀腺細(xì)胞增殖的影響,以闡明本方治療甲狀腺功能亢進(jìn)的機(jī)理。

3、土貝母為葫蘆科植物土貝母Bolbostemmapaniculatum(Maxim.)Franquet的干燥塊莖,有散結(jié)、消腫、解毒之功效。從中分離出的土貝母苷甲是其主要有效成分,具有抗腫瘤、抗病毒、免疫抑制等多種活性1。因此,我們采用RP-HPLC法建立了大鼠含藥血清中的代表性成分土貝母苷甲(土貝母)的含量測定方法,為進(jìn)一步闡明本方治療甲狀腺功能亢進(jìn)的機(jī)理提供分析方法。1儀器與試藥LC-10A高效液相色譜儀和SPD-10A紫外檢測器(日本導(dǎo)津公司)；XE215P型分析天平(Sartorius)；DiamonsilC18分析柱(25

4、0mm×4.6mm,5μm)；Easyguard保護(hù)柱(迪馬公司)；固相萃取小柱(C18SPE,200mg,3mL,瓦里安公司)。體重(330±10)g的雄性L/kg的劑量灌胃給予甲腫消浸膏劑,10只按體重給予同劑量生理鹽水,每天2次,連續(xù)7d。末次灌胃后開始計時,于60min后,用玻璃毛細(xì)管自乙醚麻醉大鼠眼底采血,收集血樣于離心試管中,放置2h促凝,1500r/min離心10min,吸取上清液,0.22μm濾膜過濾,濾液即為含藥血清和空白血清,-20℃冷凍保存。2.2甲腫消和大鼠含藥血清中土貝母苷甲的含量測定2.2.1甲腫消樣品

5、的前處理精密稱取甲腫消浸膏約3g,分別用甲醇(15、15、10mL)超聲(300in,0.45μm濾膜過濾,合并濾液,加甲醇定容至50mL。精密量取10mL,減壓除去溶劑,殘渣精密加入甲醇2mL,超聲溶解,0.45μm濾膜過濾,取續(xù)濾液作為含量測試試液。2.2.2血清樣品中土貝母苷甲的前處理凍存血清于室溫解凍備用。選取C18SPE柱(200mg,3mL,60μm),先用2mL甲醇沖洗,再用2mL純水沖洗活化；精密量取血清1mL上樣,棄去流出液,用2mL純水沖洗,再用1mL甲醇洗脫,收集甲醇洗脫液作為供試液。2.2.3色譜條件色譜柱

6、：DiamonsilC18(250mm×4.6mm,5μm)和Easyguard保護(hù)柱；流動相：甲醇-水(65∶35)；流速：1mL/min；檢測波長：214nm；進(jìn)樣10μL。色譜圖見圖1。2.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定精密稱取土貝母苷甲標(biāo)準(zhǔn)品11.8mg,用65%甲醇配成濃度為118μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,然后分別用65%甲醇稀釋制成土貝母苷甲濃度為14.75、29.5、59、88.5、118μg/mL,按“2.2.3”項色譜條件測定。以土貝母苷甲的峰面積A和濃度C作圖,進(jìn)行線形回歸,得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：A＝2503.1C－2300.5,

7、R2＝0.9996,土貝母苷甲在14.75～118μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性良好。取土貝母苷甲濃度為118μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別精密量取一定量,加入空白血清,使土貝母苷甲濃度為1.18、2.36、11.8、14.75、29.5、59、88.5μg/mL,按“2.2.2”和“2.2.3”項操作,記錄土貝母苷甲的峰面積。以峰面積A和濃度C作圖,進(jìn)行線形回歸,得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：A＝2458.2C＋2127.8,R2＝0.9993,血清樣品中土貝母苷甲在1.18～88.5μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性良好。2.2.5精密度和回收率測定取土貝

8、母苷甲濃度為59μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,按“2.2.3”項色譜條件測定3次。將峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程,計算土貝母苷甲的濃度為(59.40±2.00)μg/mL,與配制濃度比較,計算精密度,RSD＝3.39%。取土貝母苷甲標(biāo)準(zhǔn)溶液加入空白制劑中,制成濃