大孔吸附樹脂法純化黃芪皂苷

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1、大孔吸附樹脂法純化黃芪皂苷作者：劉莉，徐雅娟，徐東銘，齊濱【摘要】目的：研究大孔吸附樹脂法純化黃芪皂苷類成分條件及參數(shù)，比較不同型號樹脂測定的皂苷的含量。方法：利用大孔吸附樹脂法純化黃芪皂苷，利用比色法進(jìn)行黃芪皂苷測定。結(jié)果：總提取物中皂苷含量分別為84.6%，用D104樹脂得到的皂苷含量較高。結(jié)論：此法能較好地分離純化黃芪總皂苷，可適用于工業(yè)化生產(chǎn)。【關(guān)鍵詞】黃芪；黃芪皂苷/分離提??；復(fù)合樹脂類　　黃芪皂苷是中藥黃芪的主要有效成分之一，藥理研究證明黃芪皂苷具有消炎、降血壓、抗心肌缺氧、中樞鎮(zhèn)痛及影響血清和肝臟蛋白質(zhì)的合成等作用。大

2、孔吸附樹脂在中藥有效成分精制純化中的應(yīng)用逐年增加，在中草藥化學(xué)成分的分離、富集中的應(yīng)用也越來越受到人們的重視［1］。1實(shí)驗(yàn)材料1.1藥品與試劑黃芪藥材(內(nèi)蒙)，黃芪皂苷對照品(中國藥品生物制品檢定所)，D101型、DM401型、D104型大孔吸附樹脂(均購自上海樹脂廠)，乙醇、硫酸、香草醛等均為國產(chǎn)分析純。1.2儀器JJ1型定時(shí)電動攪拌器(上海申順科技有限公司)，ESJ1804電子天平(沈陽龍騰電子稱量儀器有限公司)，ZFQ85A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申順科技有限公司)，OPI4型UV250紫外可見分光光度計(jì)(日本島津)，數(shù)控

3、恒溫浴鍋(上海申順科技有限公司)。2實(shí)驗(yàn)方法2.1樹脂的預(yù)處理和裝柱稱取D104大孔吸附樹脂一定量，用95%乙醇浸泡24h后裝柱，然后用95%的乙醇反復(fù)洗脫，洗至洗脫液與水(1：2)混合不產(chǎn)生混濁，再用水反復(fù)洗脫，至洗脫液無乙醇味，并且樹脂柱不再下降時(shí)即可。2.2黃芪樣品液的制備稱取黃芪藥材粗粉1kg，用70%的乙醇回流提取2次(150min，120min)，提取液合并過濾，濾液減壓回收乙醇至無醇味，加水適量，靜置，濾過，定容至1000mL，得黃芪樣品液(1g生藥·mL-1)［2］。2.3大孔吸附樹脂法精密量取黃芪提取液10mL(1

4、g生藥·mL-1)，加到已經(jīng)預(yù)處理的D104樹脂柱(14mm×200mm，樹脂高度100mm)上，流速為0.6mL·min-1，上樣完畢后，用蒸餾水洗至流出液無色，再用95％乙醇洗脫，收集洗脫液至流出液無色為止，濃縮并定容至100mL(0.1g生藥·mL-1)［3］。2.4黃芪皂苷含量測定稱取5mg黃芪皂苷對照，用無水乙醇溶解并定容至10mL，分別吸取0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL，并用無水乙醇補(bǔ)足體積至0.5mL，再分別加入8％的香草醛無水乙醇試液0.5mL搖勻，置水浴中加入體積分?jǐn)?shù)為72％的硫酸5.0

5、mL搖勻，立即放入62℃恒溫水浴中，保溫30min，迅速取出置冷水浴中20min，在40min內(nèi)，于波長540nm處測定吸光度，隨行試劑空白，以黃芪皂苷的質(zhì)量B(mg)為橫坐標(biāo)，以吸光度A(ABS)為縱坐標(biāo)，可得回歸方程為：Y=1.498X+0.1307(r=0.9997)。結(jié)果表明，黃芪皂苷在(0.1-0.5)mg·mL-1的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系［4］。2.5總提取物測定精密量取上述試驗(yàn)樣品10mL，置干燥恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，置110℃干燥2h，置干燥器中冷卻1h，迅速稱重［5］。2.6對比實(shí)驗(yàn)精密量取黃芪提取液10mL

6、(1g生藥·mL-1)，加到已經(jīng)前處理的D101樹脂柱和DM401樹脂柱上，重復(fù)實(shí)驗(yàn)2.3和2.5。比較不同型號樹脂黃芪皂苷的含量。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果　　大孔樹脂法總提取物得率和總提取物中黃芪皂苷含量在不同型號的樹脂柱上是不同的，結(jié)果見表1。表1不同型號樹脂結(jié)果比較　　4小結(jié)研究中發(fā)現(xiàn)大孔吸附樹脂法純化所得黃芪皂苷的含量在不同型號的樹脂上是不同的，其中以D104大孔樹脂最適宜，所得黃芪皂苷含量最大。筆者還對樹脂的回收進(jìn)行了初步研究，發(fā)現(xiàn)隨著周期的增加，樹脂吸附容量減小，黃芪皂苷的純度和收率均呈下降趨勢，當(dāng)使用至第5-6周期后，其純度下降

7、很快。所以一般樹脂重復(fù)使用4次以后應(yīng)對樹脂進(jìn)行再生［6］。隨著吸附、洗脫次數(shù)的增加，殘留在樹脂上而不能被洗脫下來雜質(zhì)會增加，使吸附力減弱，因此使用一段時(shí)間，必須對樹脂進(jìn)行再生處理［7］?！緟⒖?/p>