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1、大孔吸附樹脂法分離純化山茱萸總皂苷論文吳紅,梁恒,吳道澄，袁忠?！娟P(guān)鍵詞】大孔吸附樹脂【Abstract】AIM：TooptimizetheextractionandrefinementoftotalsaponinsfromCornusofficinalisbycolumnchromatographyofmacroreticularresin.METHODS：TotalsaponinsLL-1ofethanolandpurifiedacroreticularresinandelutedLL-1,500mLL-1and700mLL-1ofethanol.Adsorptio
2、ncapabilityandelutionparametersCornusofficinalisenrichedin500mLL-1ofethanolelutingsolution.Thedosageofelutionreagentsesasthesamplevolumeandtheelutiveratioethodsethodtousemacroreticularresintoadsorbandpurifytotalsaponinsincornusofficinalis.【Keyacroreticularresin【摘要】目的：研究并優(yōu)化大孔樹脂法分離純化山茱萸總皂苷
3、.方法：700mLL-１乙醇提取后，上HPD300型大孔吸附樹脂，水洗后分別用300mLL-1，500mLL-1，700mLL-1乙醇洗脫，考察大孔樹脂富集、純化山茱萸總皂苷的吸附性能和洗脫參數(shù)，并與常規(guī)溶劑提取法相對照.結(jié)果：山茱萸總皂苷富集于500mLL-1乙醇洗脫液部分.freelLL-1乙醇回流提取3次［７］，過濾，減壓濃縮至無乙醇味，加蒸餾水適量，冰箱內(nèi)靜置過夜，離心得山茱萸樣品液(含生藥１kgL-1).吸取山茱萸樣品液一定量，水浴下?lián)]干，精密加入50gL-1香草醛冰醋酸02mL，08mL高氯酸，振搖混勻后于65℃水浴加熱20min，冰水冷卻后，加冰醋酸5mL
4、搖勻，隨行試劑做空白，554nm處測定A值［8］.1.2.2大孔吸附樹脂預處理與再生大孔吸附樹脂一般含有未聚合的單體及殘留溶劑，使用前須先行除去.樹脂用乙醇浸泡2d，傾去上浮物后濕法裝柱，用乙醇洗至流出液與水混合不呈現(xiàn)白色乳濁現(xiàn)象即可，然后以大量蒸餾水洗凈柱中乙醇，水浸泡備用；再生時用900mLL-1乙醇洗脫至流出液無色，以大量水洗去醇即可.如果樹脂顏色較深，可用一定濃度的酸或堿除去吸附性雜質(zhì)，最后水洗至流出液呈中性.1.2.3洗脫劑濃度的選擇精密吸取山茱萸總苷提取液5mL上柱，依次用100mL蒸餾水，300mLL-1乙醇、500mLL-1乙醇、700mLL-1乙醇各6
5、0mL洗脫，水洗脫液每25mL收集1份，乙醇洗脫液每15mL收集1份，比色法測定總皂苷含量，以容量瓶編號和總皂苷含量為坐標繪制洗脫曲線.另吸取人參皂苷Re、蔗糖和谷甾醇的混合溶液2mL，加入大孔樹脂柱，依次用水、500mLL-1，700mLL-1，900mLL-1乙醇洗脫，每2mL分段收集，薄層層析檢測收集液性質(zhì)：洗脫液濃縮后點樣，正丁醇冰醋酸水(4∶1∶5)上層徑向展開，噴苯胺鄰苯二甲酸，110℃烘5min，檢測糖的特征性斑點；氯仿甲醇水(65∶35∶10)下層展開，噴100gL-1硫酸乙醇，105℃檢測皂苷的紫色斑點；另噴200gL-1三氯化銻氯仿溶液，60~70℃
6、顯色，檢測谷甾醇（脂溶性雜質(zhì)）.1.2.4大孔樹脂吸附容量的測定精密吸取2，4，6，8，10mL的山茱萸總皂苷樣品液，分次通過預先處理好的(30±02)g大孔吸附樹脂柱，每次用20mL水洗，流出液蒸干，Liebermann反應檢測皂苷并測定總皂苷的含量，計算吸附容量.結(jié)果見Tab1.表1HPD300型大孔樹脂吸附容量測定結(jié)果（略）Tab1ResultsofadsorptioncapabilityL分別上柱，蒸餾水洗至流出液無色后，500mLL-1乙醇100mL洗脫，分段收集，測定總皂苷含量.1.2.6兩種提取工藝山茱萸總皂苷含量的比較①大孔樹脂法分離提取總皂苷：60℃下
7、干燥至恒重的山茱萸500g，6倍量、3倍量、2倍量700mLL-1乙醇提取3次，合并濾液，減壓回收乙醇至一定量，加入適量水，繼續(xù)回收至無醇味，加水使每2mL藥液相當于1g原藥.藥液通過預處理的HPD300大孔吸附樹脂柱，水洗至流出液無色后，改用500mLL-1乙醇洗脫，TLC檢測洗脫終點.濾液通過鋪有少量中性氧化鋁的漏斗，減壓回收乙醇，水浴上蒸至粘稠狀，真空干燥即得山茱萸總皂苷，總皂苷濃度以人參皂苷Re計.②溶劑法：另取干燥至恒重的山茱萸500g，700mLL-1乙醇提取3次，合并濾液，減壓濃縮后，加入適量水，乙醚、正丁醇分次萃取，正丁醇
