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《甘草細胞培養(yǎng)物黃酮含量測定方法的建立論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、甘草細胞培養(yǎng)物黃酮含量測定方法的建立論文王磊楊英周圓圓敖明章余龍江【摘要】目的建立一種簡單快速測定甘草細胞培養(yǎng)物中黃酮含量的方法。方法采用超聲乙醇浸提法提取黃酮類物質(zhì)，根據(jù)懸浮培養(yǎng)的甘草細胞中黃酮成分的結(jié)構(gòu)和光譜特性，利用10％氫氧化鉀為顯色劑，在410nm波長處測定樣品中黃酮含量。結(jié)果吸光度值與黃酮含量呈良好線性關(guān)系（r=0.9994）；回收率為98.08%，RSD為1.6%（n=5）；測定結(jié)果在80min內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)論該方法操作簡便、耗時少，可快速測定甘草培養(yǎng)物中黃酮含量?！娟P(guān)鍵詞】甘草懸浮培養(yǎng)黃酮分光光度法Abstract：Ob
2、jectiveAspectrophotometrymethodfordeterminationofflavonoidsinthesuspensioncelloflicoriceogenicagentandabsorbanceinedetryat410nm.ResultsTheresultsshog/ml(r=0.9994)andtheaveragerecoveryethodissimple,convenientandsuitablefordeterminationofflavonoidsinthesuspensioncellofli
3、corice.Keyetry藥用甘草為豆科甘草屬多年生草本植物，以根和莖入藥。臨床及藥理研究證明，甘草中主要藥用成分之一的黃酮類化合物.freel1，超聲提取60min。取出，放冷至室溫，補足損失溶液。取提取液5ml于5000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min后，取上清液2.5ml于10ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。1.3懸浮培養(yǎng)甘草細胞黃酮成分定性分析參照文獻［7，8］進行顯色反應(yīng)，并按文獻［5］利用亞硝酸鈉－鋁鹽為顯色劑對供試液顯色并在400～500nm波長進行掃描。1.4懸浮培養(yǎng)甘草細胞黃酮含量測定1.4.1
4、檢測波長的選擇準確吸取標準品溶液、供試品溶液各1ml，分別置10ml容量瓶中。將兩份溶液分別標記為1，2號，按標準曲線制備顯色溶液，并在200～500nm波長間進行掃描。1.4.2標準曲線的制備準確稱取60℃干燥至恒重的蘆丁對照品50.0mg，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。準確吸取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為標準品溶液。準確量取標準品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分別置于10ml試管中，再各加0.5ml10%KOH溶液，充分搖勻顯色5min后，用甲醇定容至10ml，搖勻
5、，用UV-2100分光光度計測定其在410nm處的吸收值。以標準品濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標做標準曲線。1.4.3精密度、加樣回收率及穩(wěn)定性實驗取同一批甘草細胞培養(yǎng)物分別制備5份樣品溶液，按標準曲線方法顯色，在410nm處測定吸光度值，考察精密度；準確量取已知黃酮含量的1ml提取液5份，分別加入一定量的蘆丁標準品，按標準曲線制作方法顯色，測定吸光度計算黃酮含量，得出回收率；將已測樣品于室溫放置10，20，40，80min后，測定樣品吸光度，考察穩(wěn)定性。2結(jié)果2.1懸浮培養(yǎng)甘草細胞黃酮成分定性分析通過黃酮類化合物特有的顯色反應(yīng)能夠定
6、性地判斷其含有的成分。懸浮培養(yǎng)甘草細胞供試液進行的顯色反應(yīng)結(jié)果如表1所示。結(jié)果表明，甘草細胞培養(yǎng)物含有結(jié)構(gòu)中不包含鄰二酚羥基的黃酮、黃酮醇、二氫黃酮等黃酮類化合物。對供試液和亞硝酸鈉－鋁鹽反應(yīng)體系進行波長掃描，反應(yīng)體系在500nm處沒有出現(xiàn)相應(yīng)的吸收鋒，進一步說明了供試液中主要成分是不含鄰二酚羥基的黃酮類化合物，結(jié)果見圖3。以上實驗表明，懸浮培養(yǎng)的甘草細胞主要成分是結(jié)構(gòu)中不包含鄰二酚羥基的黃酮、黃酮醇、二氫黃酮等黃酮類化合物。因此，亞硝酸鈉-鋁鹽顯色法不適用于懸浮培養(yǎng)甘草細胞中黃酮含量的測定。根據(jù)上述波長掃描圖，反應(yīng)體系存在410n
7、m左右的堿性顯色體系吸收峰。表1黃酮類化合物分析結(jié)果（略）2.2懸浮培養(yǎng)甘草細胞黃酮含量的測定2.2.1檢測波長的選擇通過對標準品溶液和樣品供試液在200～500nm波長范圍內(nèi)的掃描。表明蘆丁標準品和樣品溶液在410nm具有相同的吸收峰及其最大吸收值，故選擇410nm為測定波長見圖2。2.2.2標準曲線按方法1.4.2制得標準曲線，并計算得到標準方程A=2.63C+0.0224，r=0.9994（A為吸光度，C為標準品濃度）。實驗表明標準品濃度在0～0.05g/L范圍內(nèi)與吸光度A成良好的線性關(guān)系見圖3。2.2.3精密度、加樣回收率及
8、穩(wěn)定性實驗精密度實驗結(jié)果見表2，甘草細胞培養(yǎng)物中黃酮平均含量為6.415mg/g，RSD=1.362%，精密度良好。加樣回收實驗結(jié)果如表3所示，平均回收率為98.08%，RSD為1.55%。將已測樣品室溫放置10，20，40，80mi
