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1、損毀帕金森病大鼠腹側(cè)蒼白球?qū)y狀體內(nèi)谷氨酸含量的影響論文曾水林，李濤，楊鵬，康學(xué)軍，蕭靜，黃曉，劉俊華【關(guān)鍵詞】帕金森病Contentchangesofglutamicacidinstriatuminducedbylesionofventralpalliduminratsicacid(Glu)inthestriatumafterlesionofventralpallidum(VP)inParkinsonsdisease(PD)rats.METHODS:ThemodelofPDadebyinjecting6hydroxydopamine(6OHDA)intothelef
2、tsubstantianigraparspacta(SNc)andventraltegmentalarea(VTA)oftherats.AfterdamagingVPofthePDrats,byhighpressureliquidchromatography(HPLC)arkedly,andthecontentofGluinstriatum(μg/g)(3.0±0.4)al(2.2±0.7),model(1.3±0.2)andshamgroups(1.4±0.4)（P0.05）.Itreachedthepeakat2ndaybebeneficialforthetrea
3、tmentofPD.【Key;glutamicacid;rats【摘要】目的：觀察腹側(cè)蒼白球(VP)損毀后帕金森病(PD)大鼠紋狀體內(nèi)谷氨酸(Glu)含量的變化.方法：應(yīng)用6羥基多巴胺(6OHDA)制備偏側(cè)PD大鼠模型，插入電極直流電毀損VP.freel,VP)治療PD的效果及作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用核團(tuán)毀損術(shù)治療PD提供理論依據(jù).1材料和方法1.1材料健康SD大鼠60只，雌雄不拘，體質(zhì)量200~300g.用4g/L戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻醉，固定于江灣Ⅱ型腦立體定位儀，根據(jù)Paxinos等［1］腦立體定向圖譜，按照文獻(xiàn)［2］制備PD大鼠模型.選取平均轉(zhuǎn)速在7圈
4、/min以上者，為合格PD模型大鼠，共計46只，分為3組.①VP毀損組(VP)28只，常規(guī)麻醉、消毒、固定于腦立體定位儀上，根據(jù)上述腦立體定向圖譜，確定VP的坐標(biāo)：前囟后0.4mm，中線旁開2.6mm，硬膜下8.0mm.鉆開顱骨，暴露硬膜，以鎢微電極（FHC,USA；尖端直徑0.25mm，外套一自制的玻璃微電極，僅尖端暴露0.5mm，以保證毀損部位局限在靶區(qū)）插入左側(cè)VP，用直流電凝固法毀損VP.毀損參數(shù)：電極接陽性，陰極接大鼠左后肢，電流1mA，通電時間15s，為保證大鼠在術(shù)中不出現(xiàn)肌肉抽動行為，可適當(dāng)調(diào)整電流的大小.②假手術(shù)組(Sham)12只，只作麻醉、消毒、固
5、定于立體定位儀，在以上坐標(biāo)位顱骨鉆孔，VP處插入相同電極，但不進(jìn)行直流電凝固法毀損.③模型對照組(Model)6只，不進(jìn)行任何處理.④另取6只正常大鼠設(shè)為正常對照組(Normal).VP毀損組和假手術(shù)組的大鼠均于術(shù)后2mo內(nèi)進(jìn)行2～5次阿樸嗎啡(apomorphine,APO)誘導(dǎo)的行為測試［2］.VP毀損組中凡旋轉(zhuǎn)行為手術(shù)前后自身對照有明顯改善的大鼠記為成功毀損大鼠，而旋轉(zhuǎn)行為沒有明顯改善的棄用.經(jīng)篩選符合要求的VP毀損大鼠共24只.1.2方法各組大鼠于行為測試完畢后，快速斷頭處死，冰皿上迅速分離紋狀體，稱質(zhì)量，置液氮保存.檢測時加入40g/L的高氯酸200μL制備
6、勻漿，定容至1mL后加入10g/L苯胺100μL,4℃低溫離心12290g,.freelin，取上清液加丹酰氯(Sigma)衍生后加潘生丁(Sigma)內(nèi)標(biāo)，離心(4℃低溫離心12290g,10min)，取上清液20μL用于高壓液相色譜熒光檢測谷氨酸（glutamicacid,Glu)含量.色譜條件：色譜儀(島津LC10AD)，熒光檢測器（島津RF530），色譜柱為C18柱(北京康林科技有限公司，KromasilC18,250.0mm×4.6mm,5μm)，流動相：甲醇50mmol/L,醋酸鈉50mmol/L,（1∶1，其中含四氫呋喃）；激發(fā)波長為360nm，發(fā)射波長
7、為500nm；流速1mL/min.檢測工作電壓為0.7V，檢測靈敏度為20pg.經(jīng)HE染色后，在光鏡下對VP毀損組毀損區(qū)進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察，同時判定毀損靶點(diǎn)是否準(zhǔn)確.統(tǒng)計學(xué)處理：數(shù)據(jù)用x±s表示，所獲數(shù)據(jù)采用SAS統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義.2結(jié)果2.1VP毀損后對PD大鼠旋轉(zhuǎn)行為的影響各組大鼠均于術(shù)后2mo內(nèi)進(jìn)行2～5次旋轉(zhuǎn)行為測試，結(jié)果顯示：第8周時，Model組為10.3±2.9，Sham組為9.6±1.3，VP毀損組為4.4±2.0.Model，Sham和VP毀損組在各自組內(nèi)不同時間點(diǎn)比較差別無統(tǒng)計學(xué)意義；M
