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《?；撬釋Υ笫笠暰W(wǎng)膜光化學(xué)損傷c》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、?；撬釋Υ笫笠暰W(wǎng)膜光化學(xué)損傷c【關(guān)鍵詞】,?；撬?；視網(wǎng)膜光化學(xué)損傷；凋亡細(xì)胞；c 摘要：目的觀察飼料中添加?；撬釋饣瘜W(xué)損傷后大鼠光感受器細(xì)胞凋亡的影響，并進(jìn)一步從氧化應(yīng)激基因cfos表達(dá)變化角度探討其防護(hù)機(jī)制。方法70只SD大鼠隨機(jī)分為對照組、?；撬峤M。分別喂飼標(biāo)準(zhǔn)飼料或添加4％?；撬犸暳衔癸?5d后接受(3000±200)lx持續(xù)0，1，3，6，9，12,24h光照，凋亡細(xì)胞原位末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測光感受器細(xì)胞凋亡情況并計算凋亡指數(shù)(AI)；RTPCR法及免疫印跡法檢測視網(wǎng)膜內(nèi)cfosmRNA以及蛋白表達(dá)水平。結(jié)果感光細(xì)胞
2、凋亡指數(shù)隨光照時間延長逐漸增加，?；撬峤MAI顯著低于對照組(P<005)，其中光照12h?；撬峤M與對照組AI分別為(123±47)％和(324±62)％；視網(wǎng)膜cfosmRNA光照1h后一過性表達(dá)增高，牛磺酸組較對照組低(P<005)；光照后視網(wǎng)膜cfos蛋白表達(dá)逐漸升高，于3h達(dá)峰值，牛磺酸組顯著低于對照組(P<005)。結(jié)論在視網(wǎng)膜光化學(xué)損傷條件下，?；撬峥赡芡ㄟ^抑制視網(wǎng)膜cfos的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)，阻斷光感受器細(xì)胞凋亡轉(zhuǎn)導(dǎo)從而保護(hù)視網(wǎng)膜?！ ￡P(guān)鍵詞：?；撬幔灰暰W(wǎng)膜光化學(xué)損傷；凋亡細(xì)胞；cfos Effectsofta
3、urineoncfosexpressionofratretinaafterphotochemicaldamage Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofdietarysupplementationicaldamage.MethodsSeventyratslydividedintocontrolgroup(Control)and4%taurinesupplementationgroup(Taurine).Thesubjectsittedbysixcoldethod;TotalRNAandprotEi
4、nofretinaRNAlevelsinedusingRT-PCRandcfosprotEInlevelseprolonged,apoptosisindex(AI)ofphotoreceptorcellsongRNAofratretinaphotochemicaldamage. Keyicaldamage;apoptoticcell;cfos 視網(wǎng)膜是視覺形成的重要組織結(jié)構(gòu)，若光照時間或光照強(qiáng)度等超過視網(wǎng)膜承受力，則會導(dǎo)致光化學(xué)損傷〔1〕，損傷早期視功能減退，光感受器細(xì)胞丟失，后期內(nèi)層神經(jīng)元變性壞死，最終導(dǎo)致失明〔12〕。近年研究認(rèn)
5、為，凋亡是視網(wǎng)膜光化學(xué)損傷中光感受器細(xì)胞丟失的主要機(jī)制〔1,3〕，持續(xù)高強(qiáng)度光照使視網(wǎng)膜內(nèi)自由基和脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物激增，同時氧化應(yīng)激基因AP1表達(dá)上調(diào)促進(jìn)凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，且證實(shí)其亞單位cfos是必需調(diào)控因子。?；撬崤c視網(wǎng)膜生長發(fā)育和功能維持關(guān)系密切，前期實(shí)驗(yàn)已證實(shí)，4％?；撬崮苡行ПＷo(hù)光化學(xué)損傷條件下的大鼠視網(wǎng)膜〔4〕。本研究擬進(jìn)一步觀察其對光感受器細(xì)胞凋亡的影響，并從cfos表達(dá)變化角度探討防護(hù)機(jī)制?！ ?材料與方法 11實(shí)驗(yàn)動物及分組清潔級SD大鼠(第三軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院動物中心)70只，體重150g左右，雌雄各半。隨機(jī)分為對照組、
6、?；撬峤M，分別喂飼標(biāo)準(zhǔn)飼料或添加4％牛磺酸(北京世紀(jì)維他生物技術(shù)有限公司，純品)飼料15d后，各組5只大鼠分別接受(3000±200)lx持續(xù)0，1，3，6，9，12，24h光照。 12凋亡細(xì)胞的原位末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測光感受器細(xì)胞凋亡情況大鼠光照后立即取出眼球，4％多聚甲醛固定過夜，常規(guī)石蠟切片，TUNEL試劑盒(德國Roche公司)檢測視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞凋亡情況參照試劑說明書，計數(shù)10個油鏡視野下每張切片TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)，其與光感受器細(xì)胞總數(shù)比值為光感受器細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)?！ ?3視網(wǎng)膜總RNA提取及RTPCR大鼠
7、光照后立即取出眼球，解剖顯微鏡下小心剝離視網(wǎng)膜，參考Trizol試劑說明書常規(guī)提取總RNA，核酸蛋白檢測儀測定其含量與純度。-20℃保存?zhèn)溆?。RTPCR按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書進(jìn)行，以大鼠βactin為內(nèi)參，上游引物序列為5′GACCCAGATCATGTTTGAGACC-3′，下游引物序列為5′GCCAGGATAGAGCCACCAAT-3′，退火溫度為554℃，產(chǎn)物長度為684bp；cfos上游引物序列為5′GCCTTTCCTACTACCATTCC-3′，下游引物序列為5′ATCTTATTCCTTTCCCTTCG-3′，退火溫度為533℃
8、，產(chǎn)物長度為370bp。擴(kuò)增條件為94℃5min40s，各退火溫度45s，循環(huán)32次，72℃10min。2％瓊脂糖凝膠電泳，Bio-Rad凝膠成像分析系統(tǒng)掃描以及分析。PCR特異條帶以相對吸光度×面積(mm
