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1、地錦草不同萃取部位體外抗真菌作用研究論文.freelinetheantifungaleffectofdifferentextractionpartsofEuphorbiahumifusainvitro,andmeasuretheminimuminhibitionconcentrations(MICs).MethodsSeparatedtheDijincaoextractandgotfourpartsbysolventextraction.AppliedthestandarditteeforClinicalLaboratoryStandards(NCC
2、LS)：ReferenceMethodforBrothDilutionAntifungalSusceptibilityTestingofFilamentous,Fungi(M38-A).MICsofdifferentpartsofDijincaoextractagainst23strainsofmonclinicaldermatophytesextractandpetroleumetherextractcouldnotgetclearanddefiniteMICbecausetheirsolubilitydisturbedthedeterminati
3、onofexperiment’sresults.Hoifusaextractpartshaveantifungnalactivityagainstdermatophytesinvitro.Keyifusaextractparts;M38-A;antifungaleffect;invitro;MIC地錦草,維吾爾名為夏塔熱其尼(Xiahatereqini)、雅麗蔓(Yalmankulake),為大戟科植物地錦Euphorbiahumifusa38-A)4,探討其各部位的體外抗真菌活性。1材料與方法1.1藥物地錦草藥材由新疆維吾爾醫(yī)藥研究所藥劑室提供,經(jīng)
4、生藥學(xué)鑒定為大戟科植物地錦草(EuphorbiahumifusaI-1640培養(yǎng)基,美國Sigma公司;三氮嗎啡琳丙磺酸(MOPS),美國Sigma公司;沙堡氏瓊脂培養(yǎng)基(SDA),批號20080228,北京奧博星生物科技有限公司。RPMI-1640培養(yǎng)基的配制：將10.4gRPMI-1640和34.53gMOPS粉末溶于900mL蒸餾水中,用1mol/LNaOH溶液調(diào)整其pH至7.0(25℃),加蒸餾水定容至1L,G-6漏斗濾過滅菌,存于4℃冰箱備用。SDA培養(yǎng)基的配制：稱取PDA粉末67g,加入1000mL蒸餾水,搖勻加熱煮沸溶解,121℃高壓滅
5、菌20min,分裝,4℃保存,備用。1.4儀器BHC-1300ⅡA型生物安全柜,蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司;FMspx-250B型生化培養(yǎng)箱,上海?，斣囼炘O(shè)備有限公司;LeicaDM-2500型顯微鏡,德國。1.5地錦草不同部位的提取分離方法取地錦草全草10kg,粉碎,加70%乙醇回流提取2次(8、6倍),每次2h,藥渣加水煎煮提取1次(10倍,2h),分別濾過,合并醇提液,減壓回收至流浸膏狀(相對密度1.1,熱測),另水提液減壓回收至流浸膏狀(狀態(tài)同上)。合并以上醇提及水提浸膏(體積約5～10L,若粘稠可加水稀釋),依次用石油醚、氯仿、正丁醇萃取,每
6、種有機(jī)溶劑萃取5次,合并有機(jī)溶劑萃取液,分別將各有機(jī)溶劑萃取液及萃取后的水相減壓回收至干,分別得到石油醚、氯仿、正丁醇及水相4個溶劑萃取部位,稱重,粉碎,即得。1.6最低抑菌濃度測定根據(jù)NCCLS推薦的《產(chǎn)孢絲狀真菌的液基稀釋法抗真菌藥物敏感性試驗方案》(M38-A)4,測定地錦草不同萃取部位對23株皮膚癬菌的最低抑菌濃度值(MIC)。1.6.1抗真菌藥物儲備液、稀釋液的制備稱取地錦草各萃取部位分別為204.8mg,用1mL二甲基亞砜(DMSO)溶解,制成濃度為204800μg/mL的儲備液,存于-20℃冰箱備用;稱取TBF8mg,用1mLDMSO溶
7、解,制成濃度為8000μg/mL的儲備液。從中吸取1μL加RPMI-1640培養(yǎng)基499μL,使之稀釋500倍,此時,TBF儲存液濃度為16μg/mL,存于-20℃冰箱備用。將地錦草各萃取部位儲備液、TBF儲備液分別用RPMI-1640培養(yǎng)基倍比稀釋成2倍終濃度。地錦草的2倍終濃度由高到低依次為：2048、1024、512、256、128、64、32、16、8、4μg/mL;TBF的2倍終濃度由高到低依次為：0.16、0.08、0.04、0.02、0.01、0.005、0.0025、0.00125、0.000625、0.0003125μg/mL。1.
8、6.2菌接種液的制備①皮膚癬菌：將受試的皮膚癬菌接種于SDA上,26℃培養(yǎng)7～14d。吸取2mL無菌的0.8
