地錦草不同萃取部位體外抗真菌作用研究

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1、地錦草不同萃取部位體外抗真菌作用研究:安惠霞,斯拉甫?艾白,古力娜?達吾提,李治建【摘要】目的對地錦草不同萃取部位進行體外抗真菌實驗,測定其最小抑菌濃度值(MIC)。方法采用溶劑萃取法分離地錦草乙醇提取液,得到水、石油醚、氯仿、正丁醇等4個萃取部位;根據(jù)美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)推薦的《產(chǎn)孢絲狀真菌的液基稀釋法抗真菌藥物敏感性試驗方案》(M38-A),測定地錦草各萃取部位對23株臨床常見皮膚癬菌的MIC。結(jié)果由于地錦草萃取分離后的石油醚和氯仿部位在藥敏試驗中的溶解度甚小,影響結(jié)果的科學(xué)觀察,本研究主要針對正丁醇和

2、水部位的體外藥敏進行了檢測,正丁醇和水部位對真菌有明顯的抑制作用,并且正丁醇部位的作用優(yōu)于水部位。結(jié)論地錦草萃取部位具有體外抗真菌作用?!娟P(guān)鍵詞】地錦草;M38-A方案;體外試驗;抗真菌作用;最低抑菌濃度  Abstract:Objective:ToexaminetheantifungaleffectofdifferentextractionpartsofEuphorbiahumifusainvitro,andmeasuretheminimuminhibitionconcentrations(MICs).MethodsSepa

3、ratedtheDijincaoextractandgotfourpartsbysolventextraction.AppliedthestandarditteeforClinicalLaboratoryStandards(NCCLS):ReferenceMethodforBrothDilutionAntifungalSusceptibilityTestingofFilamentous,Fungi(M38-A).MICsofdifferentpartsofDijincaoextractagainst23strainsofmon

4、clinicaldermatophytesextractandpetroleumetherextractcouldnotgetclearanddefiniteMICbecausetheirsolubilitydisturbedthedeterminationofexperiment’sresults.Hoifusaextractpartshaveantifungnalactivityagainstdermatophytesinvitro.Keyifusaextractparts;M38-A;antifungaleffect;i

5、nvitro;MIC  地錦草,維吾爾名為夏塔熱其尼(Xiahatereqini)、雅麗蔓(Yalmankulake),為大戟科植物地錦Euphorbiahumifusa38-A)[4],探討其各部位的體外抗真菌活性?! ?材料與方法  1.1藥物  地錦草藥材由新疆維吾爾醫(yī)藥研究所藥劑室提供,經(jīng)生藥學(xué)鑒定為大戟科植物地錦草(EuphorbiahumifusaI-1640培養(yǎng)基,美國Sigma公司;三氮嗎啡琳丙磺酸(MOPS),美國Sigma公司;沙堡氏瓊脂培養(yǎng)基(SDA),批號20080228,北京奧博星生物科技有限公司?!?/p>

6、 RPMI-1640培養(yǎng)基的配制:將10.4gRPMI-1640和34.53gMOPS粉末溶于900mL蒸餾水中,用1mol/LNaOH溶液調(diào)整其pH至7.0(25℃),加蒸餾水定容至1L,G-6漏斗濾過滅菌,存于4℃冰箱備用。  SDA培養(yǎng)基的配制:稱取PDA粉末67g,加入1000mL蒸餾水,搖勻加熱煮沸溶解,121℃高壓滅菌20min,分裝,4℃保存,備用。  1.4儀器  BHC-1300ⅡA型生物安全柜,蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司;FMspx-250B型生化培養(yǎng)箱,上海?,斣囼炘O(shè)備有限公司;LeicaDM-2500型顯

7、微鏡,德國。  1.5地錦草不同部位的提取分離方法  取地錦草全草10kg,粉碎,加70%乙醇回流提取2次(8、6倍),每次2h,藥渣加水煎煮提取1次(10倍,2h),分別濾過,合并醇提液,減壓回收至流浸膏狀(相對密度1.1,熱測),另水提液減壓回收至流浸膏狀(狀態(tài)同上)。合并以上醇提及水提浸膏(體積約5~10L,若粘稠可加水稀釋),依次用石油醚、氯仿、正丁醇萃取,每種有機溶劑萃取5次,合并有機溶劑萃取液,分別將各有機溶劑萃取液及萃取后的水相減壓回收至干,分別得到石油醚、氯仿、正丁醇及水相4個溶劑萃取部位,稱重,粉碎,即得?!?/p>

8、 1.6最低抑菌濃度測定  根據(jù)NCCLS推薦的《產(chǎn)孢絲狀真菌的液基稀釋法抗真菌藥物敏感性試驗方案》(M38-A)[4],測定地錦草不同萃取部位對23株皮膚癬菌的最低抑菌濃度值(MIC)?! ?.6.1抗真菌藥物儲備液、稀釋液的制備稱取地錦草各萃取部位分別為204.8mg,用

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