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《干細(xì)胞的磁性標(biāo)記及肝內(nèi)活體磁共振示蹤論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、干細(xì)胞的磁性標(biāo)記及肝內(nèi)活體磁共振示蹤論文徐健，鄭敏文，宦怡，程康，趙海濤，鄭敏娟，葛雅麗，孫立軍【關(guān)鍵詞】肝；干細(xì)胞；移植；超順磁性氧化鐵；磁共振成像InvivoMRtrackingofmagicallylabeledmesenchymalstemcellsinrabbitliver【Abstract】AIM：Tolabelbonemarrocellsagicironoxid(SPIO)andtoexploretheimagecharacteristicsandsignalattenuationrulesofinvivothemagicresonanceimaging
2、(MRI)ofthelabeledcellsinrabbitliver.METHODS：Marrocells(MSCs)rabbitandincubatedagedatmultipletimepointsbyMRIincludingT1aging(T1SCsinvivoafterliverinjection.RESULTS：Labeledcellsremainedviableformultiplepassagesandretainedinvitrotheabilitiesofproliferationanddifferentiation.SPIOlabelingcau
3、sedalooreobviousattenuationeffectonFFEthanonT1SCs)，在體內(nèi)與體外均能分化為功能完備的肝細(xì)胞，肝細(xì)胞移植在急慢性肝衰竭和遺傳代謝性肝病方面具有很好的前景.但移植細(xì)胞的活體內(nèi)示蹤和更進(jìn)一步的療效觀察卻是一直以來(lái)研究面臨的難題.自I)概念后，MI已經(jīng)成為影像醫(yī)學(xué)和相關(guān)臨床醫(yī)學(xué)的研究熱點(diǎn).研究者采用氧化鐵顆粒標(biāo)記移植干細(xì)胞進(jìn)行了廣泛的磁共振（MRI）活體示蹤研究［2］.國(guó)內(nèi)的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究也開(kāi)始起步［3-4］.我們采用超順磁性氧化鐵（superparamagicironoxide，SPIO）進(jìn)行兔活體內(nèi)肝干細(xì)胞的MRI示蹤研究，
4、探討其在正常肝臟內(nèi)的成像特點(diǎn)和代謝規(guī)律等，為進(jìn)一步對(duì)肝功能不全模型進(jìn)行細(xì)胞移植研究奠定預(yù)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ).1材料和方法1.1材料健康成年家兔11只，體質(zhì)量2.4～3.0kg，雌雄不拘，第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物試驗(yàn)中心提供.隨機(jī)分為：①正常對(duì)照組1（n＝3），肝臟內(nèi)注射未標(biāo)記的骨髓干細(xì)胞；②正常對(duì)照組2（n=3），肝臟內(nèi)注射SPIO；③標(biāo)記細(xì)胞組（n=5），肝臟內(nèi)注射標(biāo)記SPIO的MSCs.細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM（美國(guó)Gibco公司），胰蛋白酶（美國(guó)Sigma公司），F(xiàn)BS（美國(guó)Gibco公司），倒置顯微鏡（Olympus公司），超凈工作臺(tái)CJ1S（天津泰斯特儀器有限公司），CO2孵箱（日
5、本池本理化工業(yè)株式會(huì)社），分子天平（日立公司），離心機(jī)802（中國(guó)上海精密儀器廠），熒光顯微鏡TE20005（日本Nikon）.ATL5000彩色多普勒超聲儀.SPIO注射液（德國(guó)Schering）：1.4mL/支，含鐵濃度0.5mol/L，鐵顆粒直徑60nm.1.2方法1.2.1MSCs的分離、純化、培養(yǎng)用30g/L戊巴比妥鈉1mL/kg耳緣靜脈麻醉.無(wú)菌操作下，分別在雙側(cè)髂后上棘與髂骨平行，由內(nèi)上向外下穿入，每只抽取暗紅色骨髓約2～3mL.將抽取的骨髓加入到含5mLDMEM液的無(wú)菌離心管中，充分混勻.再把上述細(xì)胞懸液緩慢層加到含有4mL淋巴細(xì)胞分離液(比重為107
6、7g/L)的無(wú)菌離心試管中,可見(jiàn)液體分層.常溫下2000r/min離心20min后，可見(jiàn)離心試管內(nèi)液體分為3層.收集中間云霧層的骨髓單個(gè)核細(xì)胞，加入到含4mLDMEM培養(yǎng)液的無(wú)菌離心管中，常溫下以1500r/min離心洗滌10min兩次后，傾去上清，然后用含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）20mg/L的DMEM培養(yǎng)液混懸.將分離的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后以2×108/L密度接種于25mL培養(yǎng)瓶.接種后將培養(yǎng)瓶置于37℃，50mL/LCO2及飽和濕度的孵箱中培養(yǎng).72h后更換培養(yǎng)液，此后視細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)每周換液2次.1.2.2MSCs的體外標(biāo)記和鐵濃度測(cè)定/標(biāo)記率測(cè)定原代的MSCs培養(yǎng)
7、液8mL，含細(xì)胞量1×106，Revosite與之按1∶80的比率加入100μL，在37℃,50mL/LCO2條件下共同孵化過(guò)夜，24h后用PBS液清洗兩遍，然后加入2.5g/L胰蛋白酶1～2mL，靜置2～3min，將胰蛋白酶傾倒，加入含100mL/L胎牛血清（FBS）的DMEM培養(yǎng)液終止消化，用彎頭吸管反復(fù)吹打，使細(xì)胞完全脫落，制成細(xì)胞懸液，倒置顯微鏡下觀察并測(cè)量MSCs內(nèi)鐵粒子的標(biāo)記率.1000r/min離心洗滌5min獲得標(biāo)記MSCs，注射前以生理鹽水1mL將細(xì)胞重懸.1.2.3體外培養(yǎng)條件下MSCs的生長(zhǎng)曲線將傳1代的MSCs制成細(xì)胞懸液，按
