膠質(zhì)瘤干細胞的體外磁性標記和mr示蹤研究

膠質(zhì)瘤干細胞的體外磁性標記和mr示蹤研究

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1、目錄中英文縮寫詞對照...................................4摘要....................................................5前言...................................................10材料與方法...............................................12結(jié)果.................................................

2、....18討論.....................................................33小結(jié).....................................................39參考文獻.................................................39附錄...................................................44個人簡歷...........................

3、................44致謝.....................................................45綜述.....................................................463中英文縮寫詞對照縮寫英文全稱中文全稱GSCsgliomastemcells膠質(zhì)瘤干細胞PBSphosphoricbuffersolution磷酸緩沖液TAtransfectionagent轉(zhuǎn)染劑PLLpoly-L-lysine多聚賴氨酸ultrasmall

4、superpararmagneticUSPIO超小超順磁性氧化鐵iornoxideMRImagneticresonanceimaging磁共振成像T2transverserelaxationtime橫向弛豫時間R2relaxationrate弛豫率T2WIT2-weightedimagingT2加權(quán)成像TRrepeattime重復時間TEechotime回波時間FOVfieldofview視野FAFlipangle翻轉(zhuǎn)角3-(4,5)-dimethylthiazal-2yl)-2,5-溴化-3(4,5)-二甲基噻唑M

5、TTdiphenytetrazoliumromid-2)-2,5-二苯基四氮唑4膠質(zhì)瘤干細胞的體外磁性標記和MR示蹤研究摘要研究背景與目的:神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤是顱內(nèi)最常見的實體腫瘤,占全部原發(fā)性腦腫瘤的60%以上,其中以Ⅳ級膠質(zhì)瘤惡性程度最高,具有難治療、易復發(fā)、死亡率高等特點。雖然臨床上采用外科手術(shù)、術(shù)后放療、化療等綜合治療,膠質(zhì)瘤的預后依然較差。隨著2002年Ignatova等報到了皮層的膠質(zhì)瘤存在神經(jīng)干細胞樣細胞,膠質(zhì)瘤干細胞(GSCs)引起了國內(nèi)外專家的注意,膠質(zhì)瘤干細胞也得到越來越多的認同。膠質(zhì)瘤干細胞具有自我

6、更新、增殖和多向分化等干細胞特性,是膠質(zhì)瘤的起源細胞,也是術(shù)后復發(fā)的關(guān)鍵,它的發(fā)現(xiàn)為臨床膠質(zhì)瘤的治療提供了新的策略。本實驗研究采用無血清培養(yǎng)法從大鼠C6膠質(zhì)瘤中提取、分離膠質(zhì)瘤干細胞,并對其進行鑒定;然后在體外以多聚賴氨酸(PLL)為轉(zhuǎn)染劑、利用超小超順磁性氧化鐵顆粒(USPIO)標記膠質(zhì)瘤干細胞,觀察、檢測磁性標記對膠質(zhì)瘤干細胞生物學特性的影響;對磁性標記干細胞進行磁共振掃描,尋找體外成像磁性標記細胞的最佳序列,為觀察原位種植膠質(zhì)瘤干細胞的遷移、分化等生物學特性研究提供依據(jù)。材料和方法:C6膠質(zhì)瘤細胞原位種植于25

7、0-300g左右的SD雄性大鼠大腦半球內(nèi),一定時間后(15天左右)取出腫瘤,消化、分離,用含生長因子的無血清培養(yǎng)液重懸細胞,并連續(xù)傳代。以PLL-USPIO為細胞內(nèi)對比劑對GSCs進行磁性標記,計算不同天數(shù)(1、3、5天)細胞標記陽性率、細胞活力;四氮噻唑藍(MTT)比色試驗法評價磁性標記對GSCs增殖能力的影響;將膠質(zhì)瘤干細胞重新原位種植于大鼠5腦組織中觀察磁性標記對膠質(zhì)瘤干細胞成瘤能力的影響;然后不同細胞濃度的懸液進行MRT2map、T2*map序列掃描,計算弛豫時間及弛豫率,研究評價弛豫率和細胞濃度之間的關(guān)系,

8、并進行統(tǒng)計學相關(guān)分析。結(jié)果:大鼠C6膠質(zhì)瘤分離、消化后采用無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)、傳代可以得到膠質(zhì)瘤干細胞。利用PLL轉(zhuǎn)染USPIO可以高效率標記膠質(zhì)瘤干細胞,普魯士藍染色顯示72小時干細胞標記率達92%以上;臺盼藍染色、MTT比色法及原位成瘤實驗結(jié)果顯示,磁性標記對膠質(zhì)瘤干細胞生物學特性無明顯影響。體外磁共振T2map及T2*map序列掃描結(jié)果顯示

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