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1、奧曲肽對(duì)人胃癌細(xì)胞增殖的抑制作用研究論文杜文琪張南征馬文青【摘要】目的觀察奧曲肽(octreotide，OCT)對(duì)人胃癌細(xì)胞多種生物學(xué)行為的抑制作用，并探討部分機(jī)制。方法MTT比色分析法測(cè)定OCT對(duì)胃癌細(xì)胞系MKN45生長(zhǎng)的影響，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期的改變，平板集落實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞集落形成能力，裸鼠移植瘤形成實(shí)驗(yàn)體內(nèi)觀察OCT對(duì)胃癌的作用，放免法觀察OCT對(duì)細(xì)胞因子生長(zhǎng)抑素（epidermalgroinggrool/L作用最強(qiáng)；OCT誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生G0/G1期阻滯，以O(shè)CT作用24h時(shí)最明顯；OCT可顯著抑制細(xì)胞的集落形成能力，并顯著抑制裸鼠移
2、植瘤的形成。OCT作用后細(xì)胞分泌EGF、TGF-α的量均明顯減少。結(jié)論OCT在體內(nèi)、體外均能有效抑制胃癌細(xì)胞MKN45的生長(zhǎng),可作為胃癌輔助治療手段之一?！娟P(guān)鍵詞】胃腫瘤；生長(zhǎng)抑素；細(xì)胞周期；生長(zhǎng)抑素；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-αAbstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofsomatostatinanalogueoctreotide(OCT)onthegroechanism．MethodsTheeffectofOCToncellproliferationinvitroinedbyMTT.Cellcycleetry.
3、PlatecolonyformationassayinetheabilityofcolonyformationofMKN45cells.TumortransplantationinnudemiceedtoobservetheeffectofOCTongastriccancerinvivo.ThecontentsofepidermalgroinggroediaeasuredbyRIA.ResultsThegroannerandostpotentattheconcentrationof10-6mol/L．OCTarrestedthecellcycl
4、eatG0/G1phraseandreducedcolonyformation.TherepressionpotentialofOCTonthegroiceediaofMKN45cellsaybeapromisingadjuvanttherapyforgastriccancer.Keyatostatin；cellcycle；epidermalgroinggrog/支，瑞士諾華制藥)，RPMI1640培養(yǎng)基(Gibco)，胎牛血清(杭州四季青公司)，胰蛋白酶、Propidiumiodide（PI）、3-（4，5-dimethylthiazol-2
5、-YL）-2，5-diphenyltetrazoliumbromide（MTT）(Sigma)，生長(zhǎng)抑素(EGF)RIA試劑盒(北京華英放射免疫技術(shù)研究所)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α(TGF-α)RIA試劑盒（中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院放免研究所）。1.2細(xì)胞培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞株MKN45生長(zhǎng)于含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中，內(nèi)加青霉素100×103U/L，鏈霉素100mg/L，37℃、5%CO2濃度及飽和濕度條件下常規(guī)培養(yǎng)。細(xì)胞呈單層貼壁生長(zhǎng)，每3～4天以0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA（1∶1）消化液消化傳代。1.3MTT比色分析法對(duì)數(shù)生長(zhǎng)
6、期的MKN45細(xì)胞消化后調(diào)整細(xì)胞密度為1×105/ml，接種于96孔板，每孔100μl，另加培養(yǎng)基100μl。37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)24h后，更換無血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h分組：設(shè)空白組（不加細(xì)胞）、對(duì)照組（不加藥）、OCT組（分為10-6、10-7、10-8、10-9mol/L4個(gè)濃度），每組6個(gè)復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)72h，每24h更換新鮮培養(yǎng)基和奧曲肽。終止培養(yǎng)前4h加入MTT40μl/孔，避光孵育。結(jié)束培養(yǎng)時(shí)，吸去全部上清液，加入DMSO200μl/孔，微孔板震蕩器震蕩10min，酶聯(lián)檢測(cè)儀上測(cè)定光密度（D）值（λ=550nm）。按下列公
7、式計(jì)算細(xì)胞抑制率：抑制率=［（對(duì)照組D值-空白組D值）-（實(shí)驗(yàn)組D值-空白組D值）］/（對(duì)照組D值-空白組D值）×100%1.4平板集落形成實(shí)驗(yàn)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MKN45細(xì)胞消化后吹打成單細(xì)胞懸液。將1000個(gè)細(xì)胞接種于含液體培養(yǎng)基的普通平皿中(平皿直徑為9cm)，分設(shè)對(duì)照組（不加藥）和OCT組（培養(yǎng)基中加新鮮OCT，濃度為10-6mol／L），37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)至細(xì)胞形成典型集落；以包含50個(gè)以上細(xì)胞為一個(gè)集落進(jìn)行計(jì)數(shù)，普通平皿中的細(xì)胞經(jīng)固定、蘇木精-伊紅染色、倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)細(xì)胞集落。1.5流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MKN4
8、5細(xì)胞消化后調(diào)整細(xì)胞密度為1×105/ml，接種于50ml培養(yǎng)瓶，每瓶2ml。無血清培養(yǎng)基同步化24h后分組，設(shè)0、6、12、24、36、48h共計(jì)6
