奧曲肽抑制人卵巢癌細(xì)胞增殖的研究

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1、奧曲肽抑制人卵巢癌細(xì)胞增殖的研究【關(guān)鍵詞】奧曲肽;卵巢癌;血管內(nèi)皮生長因子　　[Abstract]Objective:TostudytheeffectofoctreotideonthehumanovariancancercelllineSKOV3.Methods:MetastaticmodelsimulatinghumanovariancancerplantationoftheovariancancercelllineSKOV3intonudemice.Animalsittedtodifferenttreatmentgroups:controlgrouptre

2、atediceorsamplesinedbyimmunohistochemistryoreandtheexpressionofVEGFiceice(P<0.05).Conclusion:OctreotideinhibitsthegroanovariancancercelllineSKOV3invivo.　　[Keyatostatin,SST)是一種環(huán)狀多肽類激素,由Brazeau等[1]于1973年從羊下丘腦中分離提取?，F(xiàn)在認(rèn)為SST對(duì)許多疾病如腫瘤、炎癥、糖尿病、癲癇、早老性癡呆、帕金森病、亨廷頓舞蹈病以及艾滋病的發(fā)生、發(fā)展和防治具有重要意義[2]。奧

3、曲肽(SMS201995,OCT)為SST8肽類似物,是第一個(gè)用于臨床的SST類似物，目前其主要用于肝癌、胃癌和胰腺癌的輔助治療。　　1材料和方法　　1.1材料　　基礎(chǔ)培養(yǎng)液：RPMI1640培養(yǎng)液，加入10%小牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司);胰蛋白酶(上海華美公司)：溶于DHanks液中配制成0.25%濃度;SST類似物OCT：由上海子能制藥有限公司合成;順鉑(cisplatin):山東齊魯制藥廠產(chǎn)品，4℃保存;人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3：購自第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院婦產(chǎn)科實(shí)驗(yàn)室，細(xì)胞置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，0.25%胰蛋白酶消化細(xì)胞成單

4、細(xì)胞懸液;雌性BALB/cnu/nu裸小鼠：購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所，體重18～22g，SPF環(huán)境下飼養(yǎng);兔抗人血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)單克隆抗體：購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司?！　?.2方法　　1.2.1卵巢癌裸鼠移植瘤模型的建立將SKOV3細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液,以5×106個(gè)細(xì)胞·只-1接種于裸鼠右側(cè)腋窩靠近背部皮下，共接種20只?！　?.2.2藥物干預(yù)移植瘤建模2周后將20只裸鼠隨機(jī)分成空白對(duì)照組、OCT組、順鉑組、OCT與順鉑聯(lián)用組4組,每組5只?？瞻讓?duì)照組皮下注射生理鹽水100μg·kg-1，1次·d-1;OCT組皮下注射OCT100

5、μg·kg-1,1次·d-1;順鉑組分別于成瘤后第1、8、15、22日腹腔注射順鉑4mg·kg-1;OCT與順鉑聯(lián)用組皮下注射OCT100μg·kg-1,1次·d-1,并于成瘤后第1、8、15、22日腹腔注射順鉑4mg·kg-1。用藥4周后頸椎脫位法處死裸鼠，皮下剝離瘤體，稱取腫瘤重量，游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤長徑(a)和短徑(b)，按公式V=ab2/2計(jì)算腫瘤體積。抑瘤率=(對(duì)照組瘤體積-實(shí)驗(yàn)組瘤體積)/對(duì)照組瘤體積×100%。腫瘤標(biāo)本分為兩份，1份置于10%中性緩沖福爾馬林液中固定，常規(guī)脫水，透明，浸蠟，包埋，5μm連續(xù)切片;另1份立即制成單細(xì)胞懸液行流式細(xì)胞分析

6、?！　?.2.3病理學(xué)分析及免疫組織化學(xué)法檢測(cè)VEGF表達(dá)腫瘤切片行常規(guī)蘇木精伊紅染色，顯微鏡下觀察腫瘤細(xì)胞形態(tài)。免疫組織化學(xué)染色采用兩步法，結(jié)果判定以細(xì)胞漿呈清晰棕黃色為陽性，采用計(jì)算機(jī)圖像分析軟件ImageProplus4.5對(duì)VEGF陽性部位進(jìn)行原位定量檢測(cè)，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，自動(dòng)選取陽性部位并計(jì)算平均光密度(IOD)值,計(jì)算5個(gè)視野的平均值作為該切片的代表值?！　?.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理　　結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,數(shù)據(jù)處理采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件，多組間比較采用方差分析,兩兩之間用q檢驗(yàn)。P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?！　?結(jié)果　　2

7、.1OCT對(duì)裸鼠卵巢癌移植瘤生長的影響　　20只裸鼠接種7d后于接種部位皮下均可見直徑約2mm的瘤塊，致瘤率為100%，用藥滿28d時(shí)20只裸鼠均存活。處死裸鼠見腫瘤處皮膚表面無潰瘍結(jié)痂，腫瘤包膜完整，均可用手推動(dòng)。OCT組、順鉑組、OCT與順鉑聯(lián)用組腫瘤重量及體積均明顯低于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各用藥組兩兩比較，腫瘤重量及體積無顯著性差異。見表1。表1各用藥組移植瘤重量及體積的變化　　2.2病理學(xué)分析及免疫組織化學(xué)法檢測(cè)VEGF表達(dá)　　腫瘤組織蘇木精伊紅染色切片見腫瘤細(xì)胞大小不一，胞漿粉紅色，核圓形，腫瘤內(nèi)可見血管結(jié)構(gòu)。VEGF染色主要定位于腫瘤細(xì)

8、胞胞漿,呈棕黃色,少數(shù)血管內(nèi)皮細(xì)胞也見