夏枯草高效液相色譜指紋圖譜的研究論文

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1、夏枯草高效液相色譜指紋圖譜的研究論文.freel，流速為1ml/min。結(jié)果：標(biāo)出10個(gè)主要共有峰，方法學(xué)考察表明.freelElite色譜工作站；KQ100A型超聲波清洗器；電子天平。夏枯草對(duì)照藥材及齊墩果酸對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。夏枯草藥材分別購(gòu)自各地藥材市場(chǎng)和藥店，經(jīng)鑒定為夏枯草藥材的干燥果穗。甲醇為色譜純，其它試劑為分析純。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱：HypersilC18，4.6*250mm，10μm；流動(dòng)相：甲醇：水：醋酸（86：14：0.1）；檢測(cè)波長(zhǎng)為208nm；流速為1ml/min。2.2供試品溶液的制備將夏枯

2、草藥材擇去雜質(zhì)，60℃恒溫干燥，粉碎機(jī)粉碎，粉末過(guò)40目篩，反復(fù)進(jìn)行，直至藥材粉碎全部過(guò)篩為止。精密稱定夏枯草藥材粉末約1g，加入90%甲醇20ml，超聲30min，過(guò)濾，洗滌，合并濾液和洗液，揮干溶劑，殘?jiān)恿鲃?dòng)相溶解定容至10.00ml，溶液用微孔濾膜過(guò)濾，得夏枯草液，10μl進(jìn)樣。2.3流動(dòng)相的選擇試驗(yàn)過(guò)程中，系統(tǒng)比較了不同配比的甲醇水（80：20；84：16；86：14；88：12）和乙腈水（80：20；85：15；90：10）及添加劑的用量。結(jié)果表明，以甲醇：水：醋酸（86：14：0.1）為流動(dòng)相系統(tǒng)效果較佳。2.4檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇試驗(yàn)

3、采用DAD檢測(cè)器，在波長(zhǎng)190～400nm范圍內(nèi)進(jìn)行夏枯草樣品的吸收情況考察。通過(guò)比較各不同保留時(shí)間的峰的紫外吸收光譜，得知多數(shù)峰的最大吸收在203～210nm范圍，少數(shù)在230nm附近，綜合比較各波長(zhǎng)處的色譜圖，最終確定208nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。2.5參比峰的選擇為消除測(cè)定結(jié)果的系統(tǒng)誤差，選取與其它組份分離較好、峰形對(duì)稱、保留時(shí)間24.617min的色譜峰作為參比峰（經(jīng)與標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖譜及紫外吸收?qǐng)D譜對(duì)照，得知此組份為齊墩果酸），以便計(jì)算夏枯草藥材共同特征組份的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)含量［4］。夏枯草標(biāo)準(zhǔn)藥材的色譜圖及齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖見(jiàn)圖1和圖2。2

4、.6方法學(xué)驗(yàn)證2.6.1精密度試驗(yàn)同一夏枯草樣品液，在相同條件下，重復(fù)進(jìn)樣5次，得到色譜圖，計(jì)算保留時(shí)間和峰面積的RSD%。結(jié)果見(jiàn)表1。2.6.2重現(xiàn)性試驗(yàn)同一夏枯草樣品在相同條件下平行提取5份，分別進(jìn)樣，得到色譜圖，計(jì)算保留時(shí)間和峰面積的RSD%。結(jié)果見(jiàn)表2。2.6.3穩(wěn)定性試驗(yàn)同一夏枯草樣品液分別于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h進(jìn)樣，計(jì)算所得色譜圖中各相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間和峰面積的RSD%。結(jié)果見(jiàn)表3。圖1夏枯草標(biāo)準(zhǔn)藥材色譜圖（略）圖2齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖（略）表1精密度試驗(yàn)（略）表2重現(xiàn)性試驗(yàn)（略）表3穩(wěn)定性試驗(yàn)（略）2.7

5、夏枯草HPLC指紋圖譜的建立按供試品的制備和檢測(cè)方法，對(duì)31份夏枯草藥材分別測(cè)定色譜圖。比較各夏枯草藥材的色譜圖，結(jié)合各組份峰的紫外吸收特征，確定相同組份峰，計(jì)算各組份相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積。αi=ti/ts，α為相對(duì)保留時(shí)間，ts為內(nèi)參峰保留時(shí)間，ti為其它組分保留時(shí)間。Ar=Ai×100/∑A，Ar為相對(duì)面積值，Ai為各組分面積值，ΣA為總峰面積。選取10個(gè)主要共有峰為特征峰，其面積和占到總面積的99%以上，建立夏枯草樣品藥材的HPLC相對(duì)保留值指紋圖譜。結(jié)果見(jiàn)表4，其中αi為31種樣品譜圖中相同組份的相對(duì)保留時(shí)間值的平均值。2.8夏枯草HP

6、LC指紋圖譜相似度的計(jì)算以10批夏枯草對(duì)照藥材的HPLC圖譜為標(biāo)準(zhǔn)，用計(jì)算機(jī)輔助中藥指紋圖譜相似度計(jì)算軟件計(jì)算31個(gè)夏枯草樣品藥材的HPLC圖譜與對(duì)照藥材的相似度。結(jié)果見(jiàn)表5。表4夏枯草樣品藥材的HPLC相對(duì)保留值指紋圖譜（略）表5樣品相似度計(jì)算結(jié)果（略）3討論對(duì)夏枯草的高效液相色譜條件進(jìn)行了考察，包括流動(dòng)相的組成、配比等，并依據(jù)不同保留時(shí)間峰的紫外吸收特征確定檢測(cè)波長(zhǎng)。確定色譜條件為：流動(dòng)相為甲醇水醋酸（86：14：0.1）；流速為1ml/min；進(jìn)樣量為10μl；檢測(cè)波長(zhǎng)為208nm。在此色譜條件下，基線穩(wěn)定，各峰得到了較好的分離，峰形、保

7、留時(shí)間等也較好。對(duì)中藥夏枯草的HPLC指紋圖譜進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，建立了31種夏枯草樣品藥材的HPLC相對(duì)保留值指紋圖譜，并進(jìn)行了夏枯草樣品藥材與標(biāo)準(zhǔn)藥材相似度的研究。為夏枯草藥材的質(zhì)量控制提供了依據(jù)，為建立規(guī)范化的夏枯草種植基地提供了有效的質(zhì)量控制手段?！?/p>