蹄葉橐吾乙醇提取物對(duì)肝細(xì)胞色素p450的影響

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1、蹄葉橐吾乙醇提取物對(duì)肝細(xì)胞色素P450的影響【摘要】　　目的研究蹄葉橐吾乙醇提取物對(duì)大鼠和小鼠肝細(xì)胞色素P450（CYP450）的影響。方法蹄葉橐吾乙醇提取物口服給藥后，觀察其對(duì)小鼠戊巴比妥鈉催眠作用的影響、對(duì)大鼠肝微粒體CYP450含量、肝臟指數(shù)的影響，采用HPLC測(cè)定探針?biāo)幍拇x率觀察其對(duì)大鼠肝CYP450的7種亞型酶活性的影響。結(jié)果蹄葉橐吾乙醇提取物對(duì)戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠的睡眠時(shí)間無影響，大鼠肝CYP450含量及肝臟指數(shù)無顯著變化，對(duì)大鼠肝CYP450的7種亞型探針?biāo)幍拇x率亦無影響。結(jié)論蹄葉橐吾乙醇提取物對(duì)肝藥酶無誘導(dǎo)作用。【關(guān)鍵詞】蹄葉橐吾；肝細(xì)胞色素P45

2、0；誘導(dǎo)作用細(xì)胞色素P450（cytochromeP450,CYP450）是生物體內(nèi)參與各類外源性及內(nèi)源性物質(zhì)代謝的主要酶系，負(fù)責(zé)90%以上藥物的生物轉(zhuǎn)化。CYP450的活性可受到多種因素的影響。近年來，由于藥物代謝性相互作用誘發(fā)的不良反應(yīng)日漸引起人們的重視。但有關(guān)中草藥對(duì)CYP450影響作用的報(bào)道尚不多見。蹄葉橐吾（Ligulariafischeri）為菊科（pasitae）橐吾屬(Ligularia)多年生草本植物，又名腎葉橐吾（《中藥志》）、馬蹄葉（東北）等，其根和根莖收入吉林省藥材標(biāo)準(zhǔn)，名山紫菀［1］。藥理研究表明，其根和根莖具有鎮(zhèn)咳祛痰作用［2］，葉的提取

3、物具有抗氧化作用［3，4］，地上部分乙醇提取物具有抗炎免疫［5，6］和抗?jié)冏饔茫?］。且蹄葉橐吾的安全性較高［8，9］。本實(shí)驗(yàn)通過研究蹄葉橐吾地上部分乙醇提取物對(duì)肝CYP450的影響，預(yù)測(cè)其在聯(lián)合用藥時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生的代謝性相互作用，對(duì)蹄葉橐吾臨床合理用藥提供科學(xué)依據(jù)?！　?材料與儀器　　1.1藥品蹄葉橐吾（野生）在吉林省琿春市采集，由延邊大學(xué)藥學(xué)院劉永鎮(zhèn)教授鑒定。蹄葉橐吾地上部分乙醇提取物（ethanolextractfromLigulariafischeri，以下簡(jiǎn)寫為L(zhǎng)fe）的制備：蹄葉橐吾地上部分晾干、粉碎，用95%乙醇加熱回流提取，濾液加水放置24h，過濾后

4、用石油醚萃取，水層加熱濃縮至浸膏，每克相當(dāng)于20g生藥，實(shí)驗(yàn)用其水溶液灌胃給藥?！　?.2試劑非那西汀（phenacetin），雙氯酚酸（Diclofenac），奧美拉唑（Omeprazole），氫溴酸右美沙芬（DextromethorphanHydrobromide），氯唑沙宗（Chlorzoxazone），氨苯砜（Dapsone,aminophenylsulfone）均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所,香豆素（Coumarin）購(gòu)于沈陽市試劑三廠（化學(xué)純）。葡萄糖-6-磷酸（D-Glucose6-phosphatedisodiumsalthydrate）、氧化型輔酶Ⅱ

5、(β-Nicotinamideadeninedinucleotidephosphatesodiumsalthydrate,β-NADP)和葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(Glucose-6-phosphateDehydrogenase)購(gòu)于sigma公司。戊巴比妥鈉，Serva進(jìn)口分裝（上?；瘜W(xué)試劑分裝廠）。HPLC級(jí)甲醇、乙腈購(gòu)于美國(guó)Fisher公司。　　1.3儀器美國(guó)ThermoFinnigansurveyor高效液相色譜儀（配有四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、二極管陣列檢測(cè)器）；Xcalibur1.4色譜工作站；AgilentXDB-C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)

6、；日本島津ShimadzuUV-260紫外可見光分光光度計(jì)；MQX-200酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-TekInstrumentsInc.）；EYELA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（N-1000SD-2000）；BECKMAN公司高速冷凍離心機(jī)；2K-15型高速離心機(jī)(Sigma)；YKH-3型液體快速混合器（江西醫(yī)療器械廠）；瑞士METLERTOLEDO公司AG135型電子天平?！　?.4動(dòng)物昆明種雄性小鼠，體質(zhì)量（20±2）g；S緩沖液（含0.05mol·L-1Tris，3mmol·L-1MgCl2，0.2mol·L-1蔗糖，pH7.4）勻漿后于4℃，10000g，離心30min，取上清

7、液轉(zhuǎn)移至超速離心管內(nèi)，4℃離心，100000g，60min，沉淀即為肝微粒體。重懸后分裝，置-80℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。微粒體蛋白濃度采用Bradford法測(cè)定［10］?！　?.2.2CYP450含量及肝臟指數(shù)的測(cè)定采用Omura和Sato的方法測(cè)定CYP450含量［11］。P450(nmol·mg-1蛋白)=［ΔA(450nm-490nm)×1000］/91×蛋白濃度（mg·ml-1）。計(jì)算肝臟指數(shù)，肝臟指數(shù)（g/100g體質(zhì)量）=（肝重/體質(zhì)量）×100%?！　?.2.3肝微粒體體外溫孵實(shí)驗(yàn)將Lfe給藥組8只大鼠的微粒體蛋白稀釋至相同濃度后等體積混合，分裝至各管