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《蹄葉橐吾乙醇提取物對肝細胞色素p450的影響論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、蹄葉橐吾乙醇提取物對肝細胞色素P450的影響論文【摘要】目的研究蹄葉橐吾乙醇提取物對大鼠和小鼠肝細胞色素P450（CYP450）的影響。方法蹄葉橐吾乙醇提取物口服給藥后，觀察其對小鼠戊巴比妥鈉催眠作用的影響、對大鼠肝微粒體CYP450含量、肝臟指數(shù)的影響，采用HPLC測定探針藥的代謝率觀察其對大鼠肝CYP450的7種亞型酶活性的影響。結(jié)果蹄葉橐吾乙醇提取物對戊巴比妥鈉誘導小鼠的睡眠時間無影響，大鼠肝CYP450含量及肝臟指數(shù)無顯著變化，對大鼠肝CYP450的7種亞型探針藥的代謝率亦無影響。結(jié)論蹄葉橐吾乙醇提取物對肝
2、藥酶無誘導作用。【關(guān)鍵詞】蹄葉橐吾；肝細胞色素P450；誘導作用細胞色素P450（cytochromeP450,CYP450）是生物體內(nèi)參與各類外源性及內(nèi)源性物質(zhì)代謝的主要酶系，負責90%以上藥物的生物轉(zhuǎn)化。CYP450的活性可受到多種因素的影響。近年來，由于藥物代謝性相互作用誘發(fā)的不良反應日漸引起人們的重視。但有關(guān)中草藥對CYP450影響作用的報道尚不多見。蹄葉橐吾（Ligulariafischeri）為菊科（pasitae）橐吾屬(Ligularia)多年生草本植物，又名腎葉橐吾（《中藥志》）、馬蹄葉（東北）等
3、.freelLigulariafischeri，以下簡寫為Lfe）的制備：蹄葉橐吾地上部分晾干、粉碎，用95%乙醇加熱回流提取，濾液加水放置24h，過濾后用石油醚萃取，水層加熱濃縮至浸膏，每克相當于20g生藥，實驗用其水溶液灌胃給藥。1.2試劑非那西?。╬henacetin），雙氯酚酸（Diclofenac），奧美拉唑（Omeprazole），氫溴酸右美沙芬（DextromethorphanHydrobromide），氯唑沙宗（Chlorzoxazone），氨苯砜（Dapsone,aminophenylsulfon
4、e）均購于中國藥品生物制品檢定所,香豆素（Coumarin）購于沈陽市試劑三廠（化學純）。葡萄糖-6-磷酸（D-Glucose6-phosphatedisodiumsalthydrate）、氧化型輔酶Ⅱ(β-Nicotinamideadeninedinucleotidephosphatesodiumsalthydrate,β-NADP)和葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(Glucose-6-phosphateDehydrogenase)購于sigma公司。戊巴比妥鈉，Serva進口分裝（上海化學試劑分裝廠）。HPLC級甲醇、
5、乙腈購于美國Fisher公司。1.3儀器美國ThermoFinnigansurveyor高效液相色譜儀（配有四元泵、自動進樣器、二極管陣列檢測器）；Xcalibur1.4色譜工作站；AgilentXDB-C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；日本島津ShimadzuUV-260紫外可見光分光光度計；MQX-200酶標儀（美國Bio-TekInstrumentsInc.）；EYELA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（N-1000SD-2000）；BECKMAN公司高速冷凍離心機；2K-15型高速離心機(Sigma)；YKH-3型
6、液體快速混合器（江西醫(yī)療器械廠）；瑞士METLERTOLEDO公司AG135型電子天平。1.4動物昆明種雄性小鼠，體質(zhì)量（20±2）g；S緩沖液（含0.05mol·L-1Tris，3mmol·L-1MgCl2，0.2mol·L-1蔗糖，pH7.4）勻漿后于4℃，10000g，離心30min，取上清液轉(zhuǎn)移至超速離心管內(nèi)，4℃離心，100000g，60min，沉淀即為肝微粒體。重懸后分裝，置-80℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。微粒體蛋白濃度采用Bradford法測定［10］。2.2.2CYP450含量及肝臟指數(shù)的測定采用Omura
7、和Sato的方法測定CYP450含量［11］。P450(nmol·mg-1蛋白)=［ΔA(450nm-490nm)×1000］/91×蛋白濃度（mg·ml-1）。計算肝臟指數(shù)，肝臟指數(shù)（g/100g體質(zhì)量）=（肝重/體質(zhì)量）×100%。2.2.3肝微粒體體外溫孵實驗將Lfe給藥組8只大鼠的微粒體蛋白稀釋至相同濃度后等體積混合，分裝至各管。對照組大鼠微粒體亦作相同處理。將探針藥香豆素（CYP2A6底物）、右美沙芬（CYP2D6底物）、雙氯酚酸（CYP2C9底物）、奧美拉唑（CYP2C19底物）、氨苯砜（CYP3A4底
8、物）、非那西?。–YP1A2底物）、氯唑沙宗（CYP2E1底物）分別與給藥組或?qū)φ战M大鼠的肝微粒體于37℃溫孵。以pH7.4的Tris-Hcl緩沖液0.5ml為總反應體系，其中肝微粒體蛋白濃度1mg·ml-1，NADPH生成系統(tǒng)(NADP1mmol·L-1,葡萄糖-6-磷酸10mmol·L-1，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶1U·ml-1)，MgCl24mmol·L
