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1、天花粉蛋白對荷瘤小鼠抑瘤作用的實驗研究論文張艷瓊，黃利鳴，吳江鋒【摘要】目的通過建立荷U14小鼠宮頸癌模型，從個體水平初步探索天花粉蛋白（TCS）對荷瘤小鼠體內(nèi)抗腫瘤活性。方法建立荷U14小鼠宮頸癌模型，TCS治療，檢測抑瘤率、脾指數(shù)、流式細(xì)胞術(shù)分析T細(xì)胞亞群。結(jié)果TCS治療組，脾指數(shù)明顯高于陰性對照組，C較陰性對照組、CTX組明顯減少（P0.05）；與正常組比較無顯著性差異。TCS組的C/C較陰性對照組、正常組明顯增大（P0.05）；與CTX組比較無顯著性差異。結(jié)論在體內(nèi).freelg/kg時，具有一定的免疫調(diào)節(jié)和增強(qiáng)體液免疫功能作用?！娟P(guān)鍵詞】天花粉蛋白荷瘤鼠
2、抑瘤作用Abstract：ObjectiveTostudytheanti-tumoreffectoftrichosanthin(TCS)inU14mice.MethodsAftersettinguptheanimalmodelofU14,thesubsetoftheTcellsorinhibitoryrate,theindexofspleenandFCM.ResultsAftertreatmentalgroup.TheC/CinTCSgroupalgroups（P0.05）,buthadnosiguificantdifferenceasparedmunityand
3、increasethehumoralimmunityinvivog/kg.Keyor;Effectoftumor-inhibition人子宮頸癌是導(dǎo)致婦女死亡的一種常見惡性腫瘤。天花粉蛋白（trichosanthin，TCS)是從葫蘆科植物栝樓trichosanthinkirilouiiMaxim的塊根中提取的一種單鏈核糖體失活蛋白(ribosome-inactivatingprotein，RIP)。體外大量實驗證實其具有抗宮頸癌的作用［1，2］，為進(jìn)一步證實TCS是否具有體內(nèi)抗宮頸癌和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫的活性，我們進(jìn)行了TCS對荷小鼠宮頸磷癌U14裸鼠體內(nèi)實驗研究。1
4、材料1.1材料TCS購自上海金山制藥廠（1.2mg/ml）；環(huán)磷酰胺購自江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司；RPMI-1640培養(yǎng)基購自Gibcol公司；PE標(biāo)記C抗體購自eBioscience公司；FITC標(biāo)記C抗體購自eBioscience公司；倒置顯微鏡和多功能顯微鏡及圖像分析系統(tǒng)購自德國Leica公司；EPICSXL-4型流式細(xì)胞儀購自Beckmancoulter公司。U14腫瘤細(xì)胞株由三峽大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫重點實驗室提供。1.2動物6～8周齡近交系Balb/c小鼠32只，體質(zhì)量18～20g，雌性，購自武漢大學(xué)實驗動物中心。2方法2.1TCS對實體瘤的抑制作用復(fù)蘇U14
5、細(xì)胞株，昆明小鼠腹腔中反復(fù)傳代，第3代后5～7d，取小鼠腹水，用無菌生理鹽水調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107/ml。常規(guī)消毒后，取0.2ml細(xì)胞懸液接種于Balb/c小鼠右側(cè)腋窩皮下。接種后的小鼠隨機(jī)分3組：TCS實驗組、陰性和陽性對照組，每組8只。TCS實驗組：用生理鹽水稀釋TCS注射液，藥物濃度為0.2mg/kg，0.2ml/只，給藥1次/d，連續(xù)給藥10次。陽性對照組：環(huán)磷酰胺（cytoxan,CTX），30mg/kg。陰性對照組給予等體積的生理鹽水。另設(shè)正常組8只，不進(jìn)行任何處理。2.2組織取材和稱重第11天稱小鼠體質(zhì)量。眼球取血，置于加有抗凝劑的試管內(nèi)。處死小鼠
6、，取出腫瘤組織、脾臟，稱瘤重、脾重，計算抑瘤率(inhibitionrate,IR)。計算脾指數(shù)，公式為：脾指數(shù)(SI)=脾臟重量(S)/體質(zhì)量(小鼠皮下形成的一個異位子宮頸癌,能在小鼠皮下形成實體瘤(成瘤率達(dá)100%)，因此建立U14動物模型是研究宮頸癌的理想模型［5］。我們的研究表明TCS的抑瘤率是11.2%，采用重組免疫毒素EGF-TCS進(jìn)行靶向治療是否可以進(jìn)一步提高抑瘤率值得進(jìn)一步探討。TCS通過不同途徑影響機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫。TCS可使正常人外周血C和CD+20T細(xì)胞百分比升高,CT細(xì)胞百分比下降,從而使C/C比值增大［6］。TCS能誘導(dǎo)Th2細(xì)胞
7、中IL-4和IL-10的表達(dá)，但抑制Th1細(xì)胞中IL-2和IFN-gamma的表達(dá)［7］。我們初步探索了劑量為0.2mg/kg的TCS在機(jī)體免疫應(yīng)答中的作用，TCS可以引起小鼠外周血中C細(xì)胞顯著增加,.freelediatedBcl-2expressionintrichosanthin-inducedHelacellapoptosis［J］.BiochemBiophysResmun,2007,363(1):101.［2］王艷華，黃利鳴.OPCML、DAPK基因甲基化與宮頸癌CasKi細(xì)胞凋亡相關(guān)性的研究［J］.中國藥理學(xué)通報，2008，24(4):543.［3］孫
8、健，吳志全
