作者姓名張俊毅

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1、作者姓名：張俊毅論文題目：δ-catenin和p120ctn在胞漿中通過與E-cadherin非競爭性結(jié)合促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌的惡性表型作者簡介：張俊毅，男，1977年3月出生，2007年8月師從于中國醫(yī)科大學(xué)王恩華教授，于2010年6月獲博士學(xué)位。中文摘要前言黏附分子Catenin家族中的p120ctn和β-catenin與肺癌侵襲、轉(zhuǎn)移的關(guān)系已有報(bào)道，但該家族中的另一成員δ-catenin與肺癌的侵襲、轉(zhuǎn)移是否有關(guān)尚不清楚。與p120ctn一樣，δ-catenin既可與E-cadherin的JMD（juxtamembranedomain）位點(diǎn)結(jié)合，入核后也可與轉(zhuǎn)錄抑制因子Kaiso

2、結(jié)合。這些信息提示我們，δ-catenin在腫瘤的惡性表型中可能同樣扮有重要角色。Burger等報(bào)道與良性前列腺增生相比，前列腺癌中δ-catenin的轉(zhuǎn)錄明顯上調(diào)，其蛋白表達(dá)也顯著增加。然而，肺癌組織中δ-catenin的表達(dá)情況如何、δ-catenin的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）臨床病理因素之間存在怎樣的關(guān)系尚不清楚，δ-catenin和p120ctn與E-cadherin分子中JMD位點(diǎn)的結(jié)合是否存在競爭性等也需要證實(shí)。最初認(rèn)為δ-catenin只表達(dá)于大腦神經(jīng)元，且可與presenilin1結(jié)合，參與早老性癡呆（Alzheimer’sdisease）的發(fā)生發(fā)展。后又發(fā)

3、現(xiàn)δ-catenin對于神經(jīng)元突觸功能的維持很重要，并可作為支架蛋白而參與信號向下游的傳遞等。有文獻(xiàn)顯示，在MDCK細(xì)胞中過表達(dá)δ-catenin可以改變細(xì)胞形態(tài)，包括誘導(dǎo)層形足板的形成等。最近又有文獻(xiàn)報(bào)道，δ-catenin作為一個(gè)上游刺激信號的整合子可以促進(jìn)下游Rho活性的降低以及Cdc42和Rac活性的升高，從而導(dǎo)致了突起的形態(tài)變化。我們知道小GTPases是細(xì)胞骨架重構(gòu)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因表達(dá)通路的重要調(diào)節(jié)因子，我們也發(fā)現(xiàn)p120ctn通過小GTPases而影響肺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。因此，我們推測δ-catenin與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移之間很可能存在著聯(lián)系。在本研究中，我們檢測了11

4、5例NSCLC樣本中δ-catenin、p120和E-cadherin的表達(dá)情況并探討了它們的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系。同時(shí)，在肺癌細(xì)胞系中分別過表達(dá)或干擾δ-catenin和p120ctn，并借助免疫共沉淀的方法探討了兩者是否存在與E-cadherin的競爭性結(jié)合以及δ-catenin對肺癌細(xì)胞小GTPases活性和生物學(xué)行為的影響。材料與方法1.組織標(biāo)本與病人資料115例NSCLC患者的標(biāo)本及20例癌旁正常肺組織（距原發(fā)性腫瘤邊界5cm以上）標(biāo)本收集自中國醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科1998～2005年存檔蠟塊。115例標(biāo)本中包括50例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌標(biāo)本作為配對研究，其余65例標(biāo)本

5、具有完全隨訪資料。所有病例術(shù)前均未接受放療和化療。男性61例，女性54例，男女性別比1.1∶1，年齡33～80歲（中位年齡58歲）。按照InternationalUnionAgainstCancer（UICC）于2002年修訂的腫瘤pTNM分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期18例，Ⅱ期39例，Ⅲ期56例，Ⅳ期2例。按照WorldHealthOrganization（WHO）肺癌分類標(biāo)準(zhǔn)：鱗癌54例，腺癌61例。為了驗(yàn)證免疫組化的結(jié)果，我們另外收集了30例新鮮肺癌及癌旁正常肺組織用于檢測δ-catenin蛋白和mRNA的表達(dá)情況。2.免疫組織化學(xué)染色采用Streptavidin-Peroxidase（S

6、P）免疫組織化學(xué)方法進(jìn)行染色，檢測δ-catenin、p120和E-cadherin在115例NSCLC標(biāo)本中的表達(dá)及其與各臨床病理因素之間的關(guān)系，也檢測了其中50例原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶配對的標(biāo)本中δ-catenin表達(dá)的差異以及另65例隨訪標(biāo)本中δ-catenin表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系。3.細(xì)胞培養(yǎng)，質(zhì)粒構(gòu)建與轉(zhuǎn)染人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和SPC-A-1（以下稱SPC）培養(yǎng)于含10%FBS的RPMI1640培養(yǎng)基中。將δ-catenin質(zhì)粒（pCMV5-FLAG/δ-catenin）導(dǎo)入δ-catenin表達(dá)較低的SPC細(xì)胞系；選擇干擾效果較好的δ-cateninsiRNA序列導(dǎo)入δ-ca

7、tenin表達(dá)較高的A549細(xì)胞系。將p120ctn-1A和3A質(zhì)粒導(dǎo)入p120ctn中等量表達(dá)的A549細(xì)胞系和穩(wěn)定干擾p120ctn的SPC細(xì)胞系；采用我們已經(jīng)報(bào)道的p120ctnsiRNA質(zhì)粒和方法將該質(zhì)粒導(dǎo)入A549和SPC細(xì)胞系。4.WesternBlotting與RT-PCR應(yīng)用WesternBlotting與RT-PCR檢測肺癌及癌旁正常肺組織中δ-catenin的蛋白和mRNA表達(dá)情況。5.免疫共沉淀為了驗(yàn)證δ-catenin和p120ctn是否競爭性