三種誘導(dǎo)骨再生膜的構(gòu)建及其誘導(dǎo)成骨能力的比較

三種誘導(dǎo)骨再生膜的構(gòu)建及其誘導(dǎo)成骨能力的比較

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1、三種誘導(dǎo)骨再生膜的構(gòu)建及其誘導(dǎo)成骨能力的比較作者:姜文學(xué),曹現(xiàn)林,徐東明,胡茂忠,尤佳,孫洪范' 摘要:目的制備PLGA-bBMP,PLGA-bBMP-IGF-Ⅱ,PLGA-bBMP-IGF-Ⅱ-bFGF三種誘導(dǎo)骨再生膜并比較其修復(fù)兔橈骨骨缺損的效果,探討其作用機(jī)制。方法將IGF-Ⅱ,bFGF和bBMP,分別與PLGA復(fù)合成具有生物活性的三種誘導(dǎo)骨再生膜,用其修復(fù)兔橈骨骨缺損,以單純PLGA膜作為對(duì)照組,分別在2、4、8周進(jìn)行大體、組織形態(tài)學(xué)、四環(huán)素示蹤和組織形態(tài)計(jì)量學(xué)觀察骨缺損的修復(fù)情況,并作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;免疫組織化學(xué)檢

2、測(cè)三種生長(zhǎng)因子存在時(shí)間。結(jié)果提取的小牛骨bBMP能誘導(dǎo)成骨,三種誘導(dǎo)骨再生膜均能在體內(nèi)誘導(dǎo)新骨的形成,明顯優(yōu)于PLGA(對(duì)照組),其誘導(dǎo)效果呈現(xiàn)PLGA/bBMP(B組)  ConstructionofThreeKindsofMembraneGuidedBoneRegenerationandparisonofTheirOsteogenesisCapabilityinVivo  Abstract:ObjectiveToconstructthreekindsofartificialperiosteumorpho-geicpr

3、otEin),PLGA/bBMP+IGF-Ⅱ(Isulin-likeGroechanism.MethodsTheArtificialPeriosteumsembraneandplantedintothedefectsofradiusin18rabbitsmodels,gross,histologicalandim-munohistochemicalexaminationetricalhistologicalanalysisuscleandthreekindsofartificialperiosteumprovidedex

4、cellentconditionhadroleasguidedboneregeneration;AdministrationofIGF-ⅡbinedledtoincreasethansinglefactoronthePLGAartificialperiosteum.ThereoneBMP、bFGFandIGF-Ⅱ.  Key;polylacticl-glycolicacidcopolymer;groembraneguidedboneregeneration,MGBR)是利用生物相容性良好的膜材料植入骨缺損周圍,隔絕和保護(hù)

5、骨缺損,并引導(dǎo)和調(diào)動(dòng)組織自身的愈合能力,通過骨組織再生來修復(fù)缺損[1~3]。實(shí)驗(yàn)證明,聚乳酸-聚羥基乙酸(polylacticl-glycolicacidcopolymer,PLGA)膜具有良好的骨引導(dǎo)作用,但其本身無骨誘導(dǎo)作用。近年來,很多學(xué)者倡導(dǎo)將MGBR技術(shù)與骨生長(zhǎng)因子聯(lián)合應(yīng)用,以促進(jìn)骨再生,獲得了比單純使用MGBR技術(shù)更好的效果[4]。本實(shí)驗(yàn)將堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basicfibroblastgroorphogeicpro-tein,bBMP)與PLGA膜復(fù)合,制備三種誘導(dǎo)骨再生膜,通過其修復(fù)兔橈骨缺損的實(shí)驗(yàn)

6、,觀察MGBR作用、降解特性、生長(zhǎng)因子的緩釋作用及誘導(dǎo)成骨作用,旨在研制具有骨引導(dǎo)和骨誘導(dǎo)雙重成骨作用的可降解性誘導(dǎo)骨再生膜?! ?材料與方法  1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明小鼠10只(北京動(dòng)物所),鼠齡1.5個(gè)月,體重25~28g。日本大耳白兔27只(天津?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中心),兔齡5個(gè)月,體重2.0~3.0kg?! ?.2bBMP提取及肌袋誘導(dǎo)成骨試驗(yàn)參照Urist方法[5]提取新鮮小牛長(zhǎng)骨的bBMP,將提取bBMP凍干粉埋植于12只小鼠左下肢肌肉內(nèi),5mg/只;右下肢為對(duì)照側(cè),模擬手術(shù)注射生理鹽水。于植入術(shù)后1、2、3周切取局部組織

7、,HE染色觀察?! ?.3三種誘導(dǎo)骨再生膜的制備將90mg/mL的PLGA三氯甲烷溶液,在載玻片上流沿成膜,室溫?fù)]發(fā)15min,得到PLGA膜;用一定方法分別依次將5mg的bBMP,40活性單位IGF-Ⅱ和5μgbFGF吸附在PLGA膜上,室溫?fù)]發(fā)24h至干燥,得到PLGA/bBMP,PLGA/bBMP+IGF-Ⅱ,PLGA/BMP+IGF-Ⅱ+bFGF三種膜,塑料袋封裝,環(huán)氧乙烷消毒備用。掃描電鏡觀察膜表面微觀結(jié)構(gòu)?! ?.4建立動(dòng)物模型和實(shí)驗(yàn)分組27只日本大耳白兔,隨機(jī)分3組,每組9只,按  2.3.2PLGA/bB

8、MP實(shí)驗(yàn)組觀察(B組)Giemsa染色:術(shù)后2周PLGA/bBMP膜完整,膜管外結(jié)締組織大量增生,可見來自骨端的間充質(zhì)細(xì)胞長(zhǎng)入,缺損區(qū)斷端少許骨皮質(zhì)壞死,缺損區(qū)有少量新骨形成(見圖5a);4周缺損區(qū)內(nèi)形成較多新骨,成骨細(xì)胞和成軟骨細(xì)胞增殖較活躍(見圖5b);8周膜管內(nèi)骨缺損已被新生骨所連接,膜外形成少量骨痂(見圖5c

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