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1、醫(yī)學(xué)檢驗系臨床免疫學(xué)教研室shiying@xxmc.edu.cn抗血清的制備實驗原理在抗原刺激下可以使機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，由于抗體通常存在于血清中，因此也將機(jī)體受到抗原刺激后的血清稱為免疫血清，免疫血清中含有對應(yīng)于該抗原的多個決定簇的多種抗體—即多克隆抗體?？寡逯苽鋵嶒炘砜寡宓闹苽浞譃槿齻€步驟：抗原的制備與純化動物的免疫（注射途徑、注射次數(shù)、間隔時間等）血清分離純化與效價鑒定抗血清制備試劑與器材抗原與免疫對象細(xì)菌菌種（傷寒沙門菌O901）、健康家兔。試劑生理鹽水、麥?zhǔn)媳葷峁堋⑹克帷⒎栏瘎?.02
2、%疊氮鈉或0.01%硫柳汞）等設(shè)備與器材剪刀、鑷子、注射器、試管等器材和冰箱、離心機(jī)等設(shè)備抗血清制備實驗方法傷寒桿菌O抗原的制備取經(jīng)革蘭染色做細(xì)菌純度鑒定的傷寒沙門菌，密集劃線接種于普通瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24～48小時；用生理鹽水將細(xì)菌菌苔洗于清潔、無菌的三角燒瓶中，置60℃水浴或隔水煮沸1小時使細(xì)菌的菌毛破壞（破壞H抗原）；抗血清制備3.將菌液移入離心管4000r/min離心10min，棄去上清，并用無菌生理鹽水洗滌2次；4.取少量處理過的菌液再次接種于瓊脂平板上進(jìn)行無菌實驗（37℃，24h），確定無
3、活菌后用生理鹽水調(diào)整菌液濃度至109個/ml，加石炭酸至終濃度為0.5%，即為細(xì)菌O抗原。實驗方法傷寒桿菌H抗原的制備取有鞭毛的傷寒桿菌密集劃線接種于普通瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)24～48小時；取出培養(yǎng)板，用含有5%石炭酸（苯酚）的生理鹽水洗下瓊脂平板上的菌苔，移入無菌三角燒瓶中，置37℃水浴24h（或4℃3～5天固定殺菌）；做無菌試驗，用生理鹽水稀釋成10*9個/ml，即為細(xì)菌H抗原?？寡逯苽涿庖呷掌冢ㄌ欤┟庖咄緩娇乖庖邉┝浚╩l）1(9.8)多點皮內(nèi)傷寒桿菌O或H抗原1.06(9.13)靜脈傷寒桿菌
4、O或H抗原0.511(9.18)靜脈傷寒桿菌O或H抗原0.516(9.23)靜脈傷寒桿菌O或H抗原1.019(9.26)靜脈傷寒桿菌O或H抗原2.0實驗方法免疫方案抗血清制備實驗方法抗血清獲取試血：末次免疫7d后試血，試血一般耳靜脈或心臟采血，分離血清與傷寒沙門菌O或H抗原做試驗管凝集試驗，凝集效價（滴度）在1：1600～3200之間時即可以放血，若效價較低，可繼續(xù)加強(qiáng)免疫；放血：采用心臟采血以獲得最大血量，置37℃促進(jìn)血塊收縮，并用吸管吸取血清，3000r/min離心10min去除殘余的紅細(xì)胞。抗血清制
5、備實驗方法抗血清的鑒定效價的測定效價的測定可根據(jù)抗體的不同性質(zhì)，分別采用環(huán)狀沉淀試驗、瓊脂雙向擴(kuò)散、單項免疫擴(kuò)散、溶血試驗、凝集反應(yīng)、酶免疫測定及放射免疫分析等方法進(jìn)行測定。本實驗以凝集反應(yīng)為例?？寡逯苽涮禺愋詼y定抗體的特異性通常以交叉反應(yīng)率表示,交叉反應(yīng)率可以用競爭抑制試驗測定。親和力測定親和力測定主要有平衡透析法、酶聯(lián)免疫法和放射分析法。親和力的高低是由抗原分子的大小、抗體分子的結(jié)合位點與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。實驗方法抗體的保存抗體的保存濃度為20～30mg/ml為宜，加入1/100
6、00的硫柳汞或1/1000的疊氮鈉防腐，并加入等體積的中性甘油，分裝小瓶，置-20℃以下低溫保存?？寡逯苽渌伎寂c討論動物的選擇免疫方案的確定抗血清制備
