實(shí)驗(yàn)五：線粒體與液泡系的超活染色與觀察.doc

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1、實(shí)驗(yàn)五：線粒體與液泡系的超活染色與觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、觀察動物、植物活細(xì)胞內(nèi)的線粒體、液泡系的形態(tài)、數(shù)量與分布。2、了解細(xì)胞的超活染色技術(shù)。二、實(shí)驗(yàn)原理：活體染色是使生活有機(jī)體的細(xì)胞或組織進(jìn)行特異性著色但對樣品又沒有毒害作用的一種活體染色方法，既可以顯示生活細(xì)胞內(nèi)的某些特定結(jié)構(gòu)又不會影響細(xì)胞的生活狀態(tài)和造成細(xì)胞死亡。通常分為體內(nèi)活體染色和體外活體染色。體外活體染色又稱為超活染色?；铙w染料主要是靠染料的“電化學(xué)”特性。例如堿性燃料就是靠表面帶有的陽離子與被染的細(xì)胞部分的陰離子相互吸引而著色。詹納斯綠B和中性紅即是最常用的兩種。前者是線粒體的專一活性染色劑，線粒體中的氧化酶使染料氧化即有

2、色狀態(tài)（藍(lán)綠色），而在周圍空間中染料仍保持還原即無色狀態(tài)。中性紅對液泡系的染色有專一性，而對核與胞質(zhì)不著色。三、實(shí)驗(yàn)用品：1器材：顯微鏡，恒溫水浴鍋，刀片，鑷子，載玻片，蓋玻片，吸管，吸水紙。2試劑：Ringer溶液（NaCl0.85g，KCl0.25g，CaCl20.03g，加蒸餾水100ml）；10%、1/3000中性紅溶液：稱取0.5g中性紅溶于50mlRinger液，稍加熱(30~40℃)使之很快溶解，用濾紙過濾，裝入棕色瓶于暗處保存。臨用前，取已配制的1%中性紅溶液1ml，加入29mlRinger溶液混勻，裝入棕色瓶備用。1%、1/5000詹納斯綠B溶液：稱取50mg詹納斯綠

3、B溶于5mlRinger溶液中，稍加微熱(30~40℃)，使之溶解，用濾紙過濾后，即為1%原液。取1%原液lml加入49mlRinger溶液，即成1/5000工作液裝入瓶中備用。最好現(xiàn)用現(xiàn)配。3實(shí)驗(yàn)材料：人口腔上皮細(xì)胞，黃豆根尖。四、實(shí)驗(yàn)方法：1人口腔上皮細(xì)胞線粒體超活染色與觀察將清潔載玻片放在37度恒溫水浴鍋的金屬板上，滴加2滴1/5000詹納斯綠B溶液，隨后用牙簽在口腔頰或者上顎處刮取上皮細(xì)胞放在載玻片的染液滴中，并攪動幾下。染色處理10-15min后蓋上蓋玻片進(jìn)行觀察。2植物細(xì)胞液泡系的超活染色與觀察:取豆芽的根尖0.5cm左右的長度進(jìn)行縱切，盡量切的很薄，滴加中性紅染液，室溫染

4、色5-10min，吸去染液加一滴Ringer溶液，蓋上蓋玻片進(jìn)行觀察。注意此時應(yīng)該輕壓蓋片使根尖盡量壓扁利于觀察。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與作業(yè)：對人口腔上細(xì)胞的線粒體活性染色結(jié)果繪圖，此時應(yīng)該可見在細(xì)胞中有一個較大較明顯的細(xì)胞核，在細(xì)胞核周圍有一些藍(lán)綠色顆粒狀的線粒體分布。對黃豆根尖液泡系的染色進(jìn)行觀察，此時可分別對根尖的不同區(qū)域進(jìn)行觀察，并對其中的細(xì)胞的液泡進(jìn)行比較。在根尖生長點(diǎn)附近的細(xì)胞形狀較小排列緊密，其中的液泡被染成紅色，數(shù)量不只一個且較小；在伸長區(qū)的細(xì)胞形狀逐漸變?yōu)殚L方形，形狀較大排列較為規(guī)則，其中的液泡也逐漸變少變大，并且顏色也變淺。至成熟區(qū)后細(xì)胞中只可見一個很大的液泡。