色譜―質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)及其在衛(wèi)生理化檢驗標準中的應(yīng)用

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1、色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)及其在衛(wèi)生理化檢驗標準中的應(yīng)用摘要：色譜法和質(zhì)譜分析法的聯(lián)用，能夠充分發(fā)揮各自的優(yōu)勢，取長補短，在衛(wèi)生理化檢驗中發(fā)揮著巨大作用，色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析技術(shù)是未來儀器分析和發(fā)展的重要方向。本文就色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展歷史和種類等進行了闡述，并對色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的技術(shù)要點和質(zhì)譜儀的分類方式等進行了分析，提出了衛(wèi)生理化檢驗工作中選擇色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的幾點建議，以供參考。關(guān)鍵詞：色譜法；衛(wèi)牛理化檢驗；質(zhì)譜儀；離子源色譜法是一種有效分離分析技術(shù)，特別適合于進行有機化合物的定量分析，但定性分析則比較困難；質(zhì)譜是強有力的結(jié)構(gòu)解析工具，特異性和靈敏度都較高

2、，但在復(fù)雜冇機化合物的分析上就會顯得比較無能為力。將這兩者進行聯(lián)用是當前最為重要的分離和鑒定分析方法，能夠大大提高分析儀器的性能，擴大了應(yīng)用范圍。1色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的種類和發(fā)展歷史色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是一種以色譜為分離手段，質(zhì)譜為檢測器的檢驗方式，在衛(wèi)生理化檢驗中應(yīng)用較廣泛的為液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)[1]。GC-MS是一種比較成熟的技術(shù)，自1957年首次實現(xiàn)聯(lián)用后，該技術(shù)獲得了飛速發(fā)展。1965年出現(xiàn)商品儀器，1968年實現(xiàn)與計算機聯(lián)用。在所有聯(lián)用技術(shù)中氣-質(zhì)聯(lián)用法最為普及，也發(fā)展得最完善。氣-質(zhì)聯(lián)用儀是最早的聯(lián)用

3、儀器，但是有機物80%不能氣化，其應(yīng)用的范圍還是相對較窄。液-質(zhì)聯(lián)用儀的不足之處是沒有商品化的譜庫可對比查詢，只能自己建庫或自己解析譜圖。自1987年Smith等首次提岀CE-MS聯(lián)用方法以來，CE-MS對生物大分子的分類分析，具有較高的分離效率和高靈敏度，其應(yīng)用受到廣泛關(guān)注。2色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的技術(shù)要點色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)最為關(guān)鍵的就是“接口”問題。色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的關(guān)鍵裝置就是接口，其對接口的一般要求是：①能夠?qū)悠愤M行有效傳遞可進行有效的樣品傳遞，進入下級儀器的樣品量不少于全部的30%,以保持靈敏度；②樣品通過接口具有良好的重現(xiàn)性，以保持整個分析的重

4、現(xiàn)性；③接口對于前后兩種儀器易于操作，接口本身的操作也要簡單、方便，接口盡可能短；④樣品通過接口時一般不發(fā)生化學(xué)變化，如發(fā)生變化,可以推斷出變化前的結(jié)構(gòu)和組成（如LC-MS的ESI和APCI接口）；⑤接口應(yīng)保證色譜峰的完整，不使色譜峰加寬（即不影響分離柱效）。除以上一般耍求外，根據(jù)聯(lián)用儀器的不同特點，GC-MS和LC-MS會有不同的要求。GC-MS常用的接口有直接插入式接口，還有隙透分離器、半透膜分離器、噴射分離器等。CE-MS與LC-MS相比較乂有其不同的要求，CE流速很低，緩沖系統(tǒng)中具中等電導(dǎo)，分析毛細管兩端均需保持電接觸以確定CE的電場強度，溶質(zhì)區(qū)帶的

5、毛細管外展寬必須減低至最小以保持高分離效能等。3質(zhì)譜儀的基本結(jié)構(gòu)和分類方式質(zhì)譜儀的基本組成主要包括真空系統(tǒng)、質(zhì)量分析器、離子源、檢測器和計算機控制系統(tǒng)等。按照離子源分類可用于色譜-質(zhì)譜聯(lián)用主要有以下幾類：電子轟擊電離源（EI）、化學(xué)電離源（CI）、快原子轟擊電離源（FAB）、熱噴霧源（TSI）、電噴霧源（ESI）、大氣壓化學(xué)電離源（APCI）、激光解析源（LD）等。離子源的結(jié)構(gòu)和性能，與質(zhì)譜儀的靈敏度和分辨率有密切關(guān)系，同時也決定了適合與哪種色譜儀器聯(lián)接使用。EI穩(wěn)定，操作方便，電流強度可精密控制，電離效率高，結(jié)構(gòu)簡單所得的質(zhì)譜圖是特征的，但是不能汽化或汽化

6、時發(fā)生分解的有機物不能用。CI“軟”電離方法，得到的？

7、譜不是標準質(zhì)譜，所以不能進行庫檢索；CI還可以用于負離子質(zhì)譜（NCI）,靈敏度要比止離子的質(zhì)譜圖高2~3個數(shù)量級。FAB更加適合熱不穩(wěn)定、難氣化的有機化合物分析，可以檢測高分子量的有機化合物，主要用于磁式雙聚焦質(zhì)譜儀。TSI主要特點是適應(yīng)較大的液相色譜流速，較強的加熱蒸發(fā)作用可以適應(yīng)含水量較多的流動相，這是其它LC-MS接口，包括某些新近研發(fā)的接口也不具備的優(yōu)點。ESI和APCI都是“軟”離子源,主要用于商品接口。LD通常稱為基質(zhì)輔助激光解吸電離（MALDI）,適合于分析生物大分子，如肽、蛋白質(zhì)、核酸等

8、，與飛行時間質(zhì)譜儀（TOF）組成MALDI-TOF具有較高的靈敏度，現(xiàn)在已經(jīng)成為生物大分子分子量測定的有力工具。按照質(zhì)量分析器分類質(zhì)譜儀主要有：扇形磁場質(zhì)譜儀（MST1S）、離子阱質(zhì)譜儀（IT-MS）、四級桿質(zhì)譜儀（Q-MS）、飛行時間質(zhì)譜儀（TOF-MS）、傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜儀（FT-MS）,串聯(lián)質(zhì)譜儀和多級質(zhì)譜儀等，對應(yīng)的就是使用相應(yīng)的質(zhì)量分析器［3］。離子阱分析器結(jié)構(gòu)小巧、重量輕，但早期質(zhì)量分辨率很低，20世紀80年代以前較少使用，后來經(jīng)過改進，近年在來越來越多的氣-質(zhì)聯(lián)用儀中使用，離子阱基本不能定量且容易污染，常不適合進行食品分析。4色譜-質(zhì)

9、聯(lián)用儀在衛(wèi)生理化檢驗標準中的應(yīng)用衛(wèi)生理化檢驗所用的檢