細(xì)菌混合培養(yǎng)對細(xì)菌耐藥性的影響

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1、細(xì)菌混合培養(yǎng)對細(xì)菌耐藥性的影響李柳冰于佳孫雪奚慶（天津醫(yī)科大學(xué)300203）【摘要】近年來，耐藥性細(xì)菌的種類越來越多，其耐藥范圍越來越廣，臨床上關(guān)于細(xì)菌的培養(yǎng)方式對細(xì)菌耐藥性的變化是否存在影響的研究，對臨床上指導(dǎo)用藥物治療耐藥性細(xì)菌有重要的意義。木文通過在肉湯培養(yǎng)基中混合培養(yǎng)大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌，經(jīng)紙片擴(kuò)散法藥敏試驗觀察細(xì)菌耐藥性的前后變化，以了解混合培養(yǎng)對細(xì)菌耐藥性是否存在影響。實驗結(jié)果表明，細(xì)菌混合培養(yǎng)對細(xì)菌耐藥性有一定的作用。木文還結(jié)合其他研究,對細(xì)菌耐藥性變化的原因進(jìn)行初步探討?！娟P(guān)鍵詞】細(xì)菌混合培養(yǎng)細(xì)菌耐藥性質(zhì)粒傳遞【中圖分類號】R37【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號

2、】2095-1752（2013）18-0135-01引言紙片擴(kuò)散法藥敏試驗是觀察細(xì)菌對某種藥物是否敏感的有效方法，故可用紙片擴(kuò)散法藥敏試驗測試細(xì)菌對某種藥物耐藥性的前后變化。首先需要找出兩種細(xì)菌，它們對某一特定藥物分別顯示為敏感和耐藥，經(jīng)過實驗得出，大腸埃希蘭對新生霉素耐藥，金黃色葡萄球菌對新生霉素敏感。然后，將兩種細(xì)菌放到肉湯培養(yǎng)基當(dāng)中混合培養(yǎng)，觀察原來對新生霉素敏感的金黃色葡萄球菌耐藥性是否發(fā)生變化，以得到混合培養(yǎng)是否對細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生一定的影響的結(jié)論。隨后，查閱相關(guān)資料，探討細(xì)菌對藥物耐藥性變化的可能原因。一、材料和方法1.1材料1.1.1菌種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、各

3、自18-24h培養(yǎng)物。1.1.2培養(yǎng)基普通瓊脂平板、血瓊脂平板、肉湯培養(yǎng)基。1.1.3器材藥敏紙片（新生霉素）、接種環(huán)、試管、移液管、吸耳球、恒溫培養(yǎng)箱、酒精燈、無菌棉簽、鑷子、打火機(jī)、記號筆。1.2方法1.2.1用2支無菌棉簽分別沾取人腸埃希菌和金黃色葡萄球菌均勻密涂于兩個普通瓊脂平板上，并用鑷子夾取2片新生霉素藥敏紙片分別放于平板中央，鑷子夾紙片前應(yīng)燒灼火菌，輕壓紙片確保紙片貼牢，將平板倒扣放置于35°C恒溫箱內(nèi)18h左右。1.2.2將接種環(huán)火焰火菌，待冷后分別挑取金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌少許，先在接近液面的肉湯培養(yǎng)基試管壁上研磨并沾取少許肉湯培養(yǎng)基與之調(diào)和，使細(xì)菌均勻分

4、布于培養(yǎng)基中，管口火菌后加塞，標(biāo)記，放入35°C恒溫箱培養(yǎng)18?24h，觀察結(jié)果。1.2.3分別用移液管吸取大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌0.1ml放于冋一肉湯培養(yǎng)基中，管口滅菌后加塞，標(biāo)記，放入35"C恒溫箱培養(yǎng)18?24h，觀察結(jié)果。1.2.4將接種環(huán)火焰火菌，待冷后沾取少許大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)物涂于血平板做分區(qū)劃線，標(biāo)記，放入35"C恒溫箱培養(yǎng)18?24h,觀察結(jié)果。1.2.5用無菌棉簽沾取血平板上單一的金黃色葡萄球菌，均勻密涂于普通瓊脂平板上，并用鑷子夾取1片新生霉素藥敏紙片放于平板中央，鑷子夾紙片前應(yīng)燒灼火菌，輕壓紙片確保紙片貼牢，將平板倒扣放置于35°C恒溫

5、箱內(nèi)18h左右。二、結(jié)果2.1實驗步驟1觀察到金黃色葡萄球菌對新生霉素敏感,大腸埃希菌對新生霉素耐藥。2.2實驗結(jié)束后觀察到金黃色葡萄球菌對新生霉素的耐藥性由原來的敏感變?yōu)槟退帯?.3從本實驗可以得出，細(xì)菌混合培養(yǎng)對細(xì)菌耐藥性的變化奮一定程度的影響作用。三、討論0前，細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生，導(dǎo)致了臨床治療失敗，增加了死亡的危險性，對人類健康構(gòu)成了威脅。為此細(xì)菌耐藥性已成為了世界范圍內(nèi)廣泛注意的焦點(diǎn),各國均呼吁加強(qiáng)細(xì)菌耐藥性方面的研宄預(yù)防，WHO及其伙伴，還專門就此召開了緊急會議，要求全球范圍內(nèi)進(jìn)行耐藥監(jiān)測，以評估、預(yù)防和控制耐藥細(xì)菌的出現(xiàn)和傳播。細(xì)菌耐藥性是指細(xì)菌對于抗菌藥物作用的耐

6、受性，耐藥性?一旦產(chǎn)生,藥物的化療作用就明顯下降，所以研究細(xì)菌的耐藥性變化奮重要的臨床意義?？刂萍?xì)菌耐藥性的傳播，奮助于建立一個更為良好的醫(yī)療衛(wèi)生環(huán)境。查閱到的相關(guān)資料顯示，自然狀態(tài)下細(xì)菌基因轉(zhuǎn)移和重組的主要方式冇轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、接合、轉(zhuǎn)換這四種，耐藥性基因可以通過前三種方式傳播，其中，轉(zhuǎn)化是將外源DNA分子引入受體細(xì)胞，使之獲得新的遺傳性狀的一種重要手段，是耐藥性基因在不冋種屬細(xì)菌間傳播耐藥性的重要方式。本實驗通過人腸埃希菌和金黃色葡萄球菌的混合培養(yǎng)，使部分原來對新生霉素敏感的金黃色葡萄球菌耐藥性發(fā)生變化，轉(zhuǎn)變?yōu)閷π律顾啬退?。K耐藥性機(jī)制很可能是大腸埃希菌將K?本身的耐藥性質(zhì)粒

7、傳遞給敏感的金黃色葡萄球菌從而使得金黃色葡萄球菌獲得耐藥性。進(jìn)一步探討金黃色葡萄球菌獲得耐藥性的機(jī)制，由于耐藥性根據(jù)K發(fā)生原因可分為獲得耐藥性和天然耐藥性，故尚不能排除耐新生霉素的金黃色葡萄球菌，是在新生霉素存在的環(huán)境中，選擇出來的自然耐藥性突變株；也不能排除新生霉素敏感性的金黃色葡萄球菌攝取了大腸埃希菌耐新生霉素的DNA后，在金黃色葡萄球菌體內(nèi)又重新發(fā)生了整合，而并非大腸埃希菌耐藥性質(zhì)粒在金黃色葡萄球菌體內(nèi)的自主復(fù)制表達(dá)。故本實驗并不能確切證明細(xì)菌混合培養(yǎng)對細(xì)菌耐藥性的影響是由于耐藥性質(zhì)粒