血球與溶血因素對elisa檢測的干擾與洗板的消除作用

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1、血球與溶血因素對ELISA檢測的干擾與洗板的消除作用鐘有光勞希盤珍梅（廣丙梧州市疾病預(yù)防控制中心543002）【中圖分類號】R446.1【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1672-50S5（2010）27-0172-03【摘要】目的探討血清樣品混雜血球或溶血對酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（EUSA）檢測乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的干擾影響及消除措施。方法使用兩種試劑盒設(shè)置不同的洗板程序，以HBsAg陰性血清作稀釋模擬制備的含不同濃度血球的溶血與不溶血標(biāo)木做實(shí)驗(yàn)。結(jié)果上海某試劑盒在RBC含量0.36×1012/L?7.22×1012八（無溶血）系

2、列檢樣中洗板6次（試盒設(shè)置）者所測8個檢樣全部出現(xiàn)假陽性，吸光值A(chǔ)在0.214?3.288間；增加洗板至12次則假陽性全部消除。北京某試劑盒洗板5次（試盒設(shè)置）在RBC含量0.37×1012/L?7.34×1012/L（無溶血）、HGB含量19g/L?232g八（溶血）兩系列檢樣中未出現(xiàn)陽性；當(dāng)洗板10次時，含血球無溶血標(biāo)木洗10次A值明顯低于洗5次者（p<0.01）。結(jié)論血球或溶血標(biāo)木對EUSA檢測HBsAg有干擾并可能導(dǎo)致假陽性，適當(dāng)增加洗板次數(shù)可消除干擾影響。【關(guān)鍵詞】EUSA—步法HBsAg檢測血球因素溶血因素EUSA干擾

3、與消除ELISA—步法檢測乙肝病毒（HBV）標(biāo)志物檢測A靈敏度高，特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用。但在質(zhì)量監(jiān)督中、尤其在一些基層實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)，由于血球或溶血因素對檢測的干擾影響導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性并不少見。對其影響及消除我們作了實(shí)驗(yàn)研究并予實(shí)踐，報告如下。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)研究標(biāo)木來源與質(zhì)監(jiān)檢查木單位健康體檢（靜脈血）檢測后剩余標(biāo)木，實(shí)驗(yàn)室日常檢測工作中質(zhì)量監(jiān)督檢查。1.2實(shí)驗(yàn)標(biāo)木制備試驗(yàn)前取已知HBsAg陰性標(biāo)木15份小心收集其血清于一試管混合搖勻?yàn)樵堆?；收集血球（無菌剔除纖維蛋白原，無凝集）輕搖勻，經(jīng)普通離心1500轉(zhuǎn)6min,吸棄上清液剩下為原倍血球。

4、采取逐級稀釋法，以原倍血清配制原倍血球成血球含量為80%、60%、50%、40%、20%、10%、5%7管不同濃度的血清血球混合物，并與原倍血球管于日本光電MEK-6318K血球儀測紅血球（RBC）、血紅蛋白（HGB）含量。1.2.1試驗(yàn)標(biāo)本上述系列不同血球濃度管及原倍管搖勻后一分為二成2份，?其中1份置冰箱冷凍室15min,再置37°Cl0min使血球完全溶解（溶血），另1份不作處理（無溶血），2份標(biāo)本與原倍血清同吋作檢測。1.3試劑上海某生物技術(shù)冇限公司生產(chǎn)，批號：20050801；北京某生物藥業(yè)股份有限公司，批號：20070802o均為效期內(nèi)使用。

5、1.4儀器洗板機(jī)：ELX50型；酶標(biāo)儀：安圖2010型。1.5檢測方法EUSA雙抗體夾心一步法，嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行。檢測波長450nm，用空白孔凋零測定各孔吸光值（A）。結(jié)果判斷根據(jù)試劑盒說明書判斷標(biāo)準(zhǔn)，陰性、陽性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合試劑盒要求。2試驗(yàn)與結(jié)果2.1含血球、溶血標(biāo)本對檢測的非特異性影響及洗板環(huán)節(jié)的消除作用2.1.1上海某試劑盒對含血球標(biāo)本的檢測試驗(yàn)制備系列含不冋濃度血球標(biāo)本，設(shè)置洗板6次（試劑盒程序，全程6min）、12次（6次2遍）兩種洗板程序作檢測觀察。結(jié)果洗板6次者所檢8管均出現(xiàn)陽性反應(yīng)；當(dāng)洗板程序選12次吋，則全部變?yōu)殛幮裕⒂?7.5

6、%（3/8）的樣管為負(fù)值；而原倍血清洗板6次、12次A值都在較低水平。試驗(yàn)未見A值高低與RBC含量成比例聯(lián)系及增加洗滌對陽性血清A值有影響。見表1。注：臨界值0^0什=陰性對照孔A均值×2.1（陰性對照孔低于0.05者按0.05計算），≥0.105為陽性；*最后一次灌注洗液后肉眼可見孔中液體呈少許淡紅色；**試劑盒要求洗滌程序。2.1.2北京某試劑盒對含血球、溶血標(biāo)本的檢測試驗(yàn)設(shè)置洗板5次（試劑盒程序，全程5min）、10次（5次2遍）、3次（全程3min）3塊檢測板，每板同吋加無溶血、溶血兩系列標(biāo)本進(jìn)行配對檢測。結(jié)果洗板3次者，原倍血

7、球的不溶血（RBC7.34×1012/L）、溶血（HGB232g/l）樣管均出現(xiàn)假陽性，且A值在較高水平；洗板5次者兩系列均未出現(xiàn)陽性反應(yīng)，且A值在較低水平；當(dāng)洗板為10次吋兩系列均有75%（6/8）的樣管A值出現(xiàn)負(fù)值。兩系列各自配對，含血球不溶血標(biāo)本洗10次A值明顯低于洗5次者（t=4.840,p<0.01）,溶血標(biāo)本之間則無統(tǒng)計學(xué)差別（t=2.008,p>0.05）；同一洗板次數(shù)間配對檢測，A值結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差別（t在0.356?1.187之間，p<0.01）；原倍血清洗板3次、5次、10次，A值都在較低水平，增加洗板次數(shù)對陽性血清A值未見

8、冇影響。見表2。注：臨界值cutoff=陰性對照孔A均值×2.1（陰