月季月月紅酵母單雜交cdna文庫(kù)及rrmyb7誘餌載體構(gòu)建研究

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1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)書學(xué)位論文是否保密舀如需保密，解密時(shí)間年月目獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果．盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得華中農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書丙使用過的材料．指導(dǎo)教癖對(duì)此進(jìn)行了審定．與我一同工作的同志對(duì)本研究所斂的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確豹說明，并表示了謝意．研究生簽名：讕8時(shí)聞：知j卜年25月勺日學(xué)位論文使用授權(quán)書零人完全了解華中農(nóng)

2、業(yè)大學(xué)關(guān)予保存．使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)生必須按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印刷本和電子版本；學(xué)校有權(quán)保存提交論文的印刷版和電子版，并提供目錄檢索和閱覽服務(wù)，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。本人同意華中農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，同時(shí)本人保留在其他媒體發(fā)表論文的權(quán)力．洼：保密學(xué)位論文(印涉及技術(shù)秘密、商業(yè)秘密或申請(qǐng)專利等潛在譬要提交保密的論文)在解密后適用于本授權(quán)書．㈨黼始錯(cuò)礬銣娩寺【璇簽名日期：乃I卜年5月?日簽名日期：；b丫年o‘月f。鑫月

3、季“月月紅”酵母單雜交eDNA文庫(kù)及I?rMYB7誘餌載體構(gòu)建目錄摘要。iAbstact．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．iii縮略語表．v第一章文獻(xiàn)綜述1lMYB轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展l1．1MYB轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特征和分類．21．2MYB基因家族的功能32酵母雙雜交及酵母單雜．52．1酵母雙雜交原理62．2酵母雙雜交技術(shù)在植物研究中的應(yīng)用。72．3酵母雙雜交的優(yōu)缺點(diǎn)102．4酵母單雜交原理及應(yīng)用113研究的目的和意義。13第二章“月月紅”酵母單雜交eDNA文庫(kù)的構(gòu)建．13l引言142材料與方法142．

4、1植物材料142．2主要試劑和藥品142．3培養(yǎng)基142-4酵母單雜交AD—eDNA文庫(kù)的構(gòu)建．152．4．1dseDNA的準(zhǔn)備152。4。2酵母感受態(tài)的制備．192．4．3酵母單雜交eDNA文庫(kù)的建立．203結(jié)果與分析223．1“月月紅”花瓣與花芽mRNA和SMART雙鏈eDNA的質(zhì)量．．223．2酵母單雜交AD．eDNA文庫(kù)效率的鑒定．244．討論一25第三章MYB7基因誘餌載體的構(gòu)建一261MYB7酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建．261．1引言一26華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2014屆碩士研究生學(xué)位論文1．2材料與方

5、法261．2．1菌株和質(zhì)粒．261．2．2試劑盒及常用試劑．261．2．3培養(yǎng)基．271．3玫瑰MYB7基因酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建271．3．1基因引物設(shè)計(jì)及MYB7基因cDNA全長(zhǎng)的克?。?71．3．2片段回收與連接一281．3．3克隆載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌并進(jìn)行陽性克隆篩選．291．3．4質(zhì)粒提取一291．3．5雙酶切及目的片段的回收與連接、熱激．301．3．6篩選陽性克隆并提質(zhì)粒雙酶切檢測(cè)3l1．3．7重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)Y187321．4結(jié)果與分析331．4．1MYB7誘餌載體的構(gòu)建331．4．2酵母Y187

6、轉(zhuǎn)化菌株的鑒定．．341．5討論一352MYB7基因啟動(dòng)子克?。?62．1引言．362．2玫瑰基因組DNA的提?。?62．3引物設(shè)計(jì)372．5結(jié)果與討論39第四章前景展望．42參考文獻(xiàn)43附錄50致謝53U月季“月月紅”酵母單雜交cDNA文庫(kù)及Rr／,／YB7誘餌載體構(gòu)建摘要轉(zhuǎn)錄因子通過激活或者抑制基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)來調(diào)節(jié)植物體內(nèi)的各種生理生化過程，植物中包含許多的轉(zhuǎn)錄因子家族，MYB基因家族就是其中一類。多年來人們對(duì)植物體內(nèi)的MYB轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行了大量的研究，分析其蛋白的結(jié)構(gòu)及功能，現(xiàn)有研究表明MYB蛋白

7、在植物生長(zhǎng)發(fā)育的多個(gè)階段包括植物次生代謝、植物細(xì)胞形態(tài)建成以及植物抗逆脅迫應(yīng)答等方面都起著重要作用。目前，對(duì)MYB轉(zhuǎn)錄因子的研究大部分還停留在分析其生理功能或單個(gè)MYB基因的作用方面，對(duì)于MYB蛋白調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的研究、MYB基因家族成員間的互作以及MYB基因與其它轉(zhuǎn)錄因子家族之問的作用機(jī)制還缺乏了解。探討多個(gè)基因甚至整個(gè)MYB家族基因問的復(fù)雜調(diào)控網(wǎng)絡(luò)有助于在整體水平上利用MYB基因?qū)χ参镞M(jìn)行定向改良，這將成為今后對(duì)MYB基因家族的研究重點(diǎn)。為了探索MYB基因家族的復(fù)雜調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，可以運(yùn)用酵母雙雜交及酵母單雜交

8、技術(shù)來找尋MYB蛋白及MYB基因啟動(dòng)子的互作蛋白編碼序列。我們選擇可能與植物生長(zhǎng)與開花相關(guān)的MYB基因家族成員MYB7作為研究對(duì)象，以周年開花不斷的薔薇科植物“月月紅”(Rosachinensis‘Slater’ScrimsonChina’)作為植物材料，構(gòu)建了“月月紅”酵母單雜交cDNA文庫(kù)和MYB7酵母雙雜交誘餌載體PGBKT7．MYB7，并運(yùn)用FPNI—PCR方法擴(kuò)增出MYB7基因上游1．86kb長(zhǎng)度序列，為后期的酵母單雜交和酵母雙雜