型流感嗜血桿菌結合疫苗

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1、b型流感嗜血桿菌結合疫苗bXingLiuganshixueganjunJieheYimiaoHaemophilusInfluenzaeTypebConjugateVaccine本品系用純化的b型流感嗜血桿菌(Hib)莢膜多糖（Capsularpolysaccharide，CPS）抗原，通過己二酰肼（ADH）與破傷風類毒素（Tetanustoxoid，TT）蛋白共價結合制成。用于預防b型流感嗜血桿菌引起兒童的感染性疾病，如腦膜炎、肺炎等。1基本要求生產和檢定用設施、原料及輔料、水、器具、動物等應符合“凡例”的有關要求。2制造2.1菌種生產用

2、菌種應符合“生物制品生產檢定用菌毒種管理規(guī)程”的有關規(guī)定。2.1.1菌種名稱及來源采用b型流感嗜血桿菌CMCC58547或CMCC58534菌株，來源于中國藥品生物制品檢定所。2.1.2種子批的建立應符合“生物制品生產檢定用菌毒種管理規(guī)程”的規(guī)定。2.1.3種子批的傳代主種子批啟開后傳代次數(shù)不超過5代，工作種子批啟開后至接種發(fā)酵罐培養(yǎng)傳代次數(shù)不得超過5代。2.1.4種子批菌種的檢定檢定菌種可用含羊血的巧克力培養(yǎng)基或Hib綜合培養(yǎng)基。2.1.4.1培養(yǎng)特性b型流感嗜血桿菌菌種在普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上不生長，在含羊血的巧克力培養(yǎng)基或在Hib綜合

3、瓊脂培養(yǎng)基上生長，生長需要X因子（氯化血紅素）、V因子（β輔酶A）；衛(wèi)星試驗陽性，菌落形狀灰白色、半透明、光滑凸起，濕潤，邊緣規(guī)則。2.1.4.2染色鏡檢應為革蘭氏陰性短小桿菌、有莢膜，有時連成線狀，亦可有單個陰性球菌。2.1.4.3生化反應發(fā)酵葡萄糖、木糖、半乳糖，產酸不產氣。不發(fā)酵蔗糖、乳糖和果糖。賴氨酸脫羧酶反應呈陰性。2.1.4.4血清學試驗將在35～37℃培養(yǎng)的菌苔，與Hib免疫血清進行玻片凝集試驗，應有強凝集反應。2.1.5種子批的保存種子批應凍干后保存于8℃以下。2.2原液2.2.1生產用種子啟開工作種子批菌種，接種在液體或

4、固體Hib綜合培養(yǎng)基上，制備數(shù)量適宜的生產用種子。2.2.2生產用培養(yǎng)基采用Hib綜合培養(yǎng)基。不得含有對人體有害或其他過敏原物質。2.2.3培養(yǎng)采用培養(yǎng)罐液體培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中取樣進行純菌試驗、涂片革蘭氏染色鏡檢，如發(fā)現(xiàn)污染雜菌，應廢棄。2.2.4收獲及殺菌于對數(shù)生長的后期或靜止期的前期終止培養(yǎng)，取樣進行菌液濃度測定及純菌檢查，然后于培養(yǎng)物中加入適宜濃度的甲醛溶液或脫氧膽酸鈉溶液殺菌，以確保殺菌完全及不損傷Hib莢膜多糖為宜。2.2.5多糖提取和純化2.2.5.1將已殺菌的培養(yǎng)物，離心去菌體后收集上清液，采用十六烷基三甲基溴化銨（CTAB

5、）沉淀收集復合多糖，乙醇沉淀收集粗制多糖，或超濾濃縮后乙醇沉淀，取上清，然后加入適宜濃度的乙醇溶液沉淀多糖，并依次用無水乙醇、丙酮洗滌沉淀物，干燥后即為粗制多糖，-20℃或以下保存。將粗制多糖溶解于1/10飽和醋酸鈉溶液中，然后按適當比例用冷酚溶液重復抽提數(shù)次。收集上清液，并透析或超濾脫酚，再加乙醇至最終濃度為60%-80%，離心后收集沉淀物，或超濾濃縮后乙醇沉淀，取上清，然后加入60%-80%的乙醇溶液沉淀多糖，依次用無水乙醇、丙酮于離心洗滌，真空干燥，所得固體即為精制多糖。2.2.5.2多糖檢定按3.1項進行。2.2.5.3保存及有效

6、期保存于-20℃或以下，保存時間按批準的執(zhí)行。2.2.6多糖衍生2.2.6.1將精制多糖溶解后，按適宜比例加入溴化氰進行活化，然后向反應液中加入適宜濃度的己二酰肼溶液，反應過夜。再將反應液超濾或透析?？蓛龈墒占腆w衍生物。2.2.6.2多糖衍生物檢定按3.2項檢定。2.2.6.3保存及有效期保存于－20℃或以下，保存時間不超過30天。2.2.7載體蛋白載體蛋白為破傷風類毒素。破傷風類毒素原液制造和檢定應符合“吸附破傷風疫苗”2.1-2.2項規(guī)定。可采用柱色譜或其他經批準的方法對破傷風類毒素原液進一步純化，并配制至適宜濃度。2.2.8多糖蛋

7、白結合物的制備2.2.8.1結合多糖衍生物與破傷風類毒素蛋白等量混合，加入碳二亞胺(EDAC)進行反應。然后透析或超濾透析。2.2.8.2結合物純化結合物用柱色譜純化,收集Vo附近的洗脫液，合并各次層析收獲的洗脫液即為純化的結合物，除菌過濾后,即為結合物原液。2.2.9原液檢定按3.3項檢定。2.2.10保存及有效期保存于2～8℃，保存時間不超過6個月。2.3半成品2.3.1配制用氯化鈉注射液稀釋多糖結合物原液，每1毫升疫苗溶液含Hib莢膜多糖應不低于20μg。2.3.2半成品檢定按3.4項進行。2.4成品2.4.1分批應符合“生物制品分

8、批規(guī)程”規(guī)定。2.4.2分裝應符合“生物制品分裝和凍干規(guī)程”規(guī)定。2.4.3規(guī)格每瓶0.5ml，每1次人用劑量0.5ml，含純化b型流感嗜血桿菌莢膜多糖10μg。2.4.4包裝應符合“生物制品