雙熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒

《雙熒光素酶報(bào)告質(zhì)?！酚蓵?huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。

1、為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展，保障停車(chē)場(chǎng)安保新項(xiàng)目的正常、順利開(kāi)展，特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)劃雙熒光素酶報(bào)告質(zhì)?！　‰p熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒構(gòu)建　　基因3’UTR的克隆，　　表Slug基因3’UTR基因克隆及結(jié)合區(qū)突變引物：引物名稱(chēng)　　Slug-3’UTR-PF　　Slug-3’UTR-PR　　Slug-mut-PF　　Slug-mut-PR：引物序列5-TCGACCGGTTGAGTGACGCAATCAATGTTTACTCGAAC5--GGACTAGTCAAACAATTCTTTGTACAGTGGTTTGGTAC5-GATTAGTCCTGAACATCCATGGCGCAT

2、GCTCCATTGTCTTAC5-ATGGATGTTCAGGACTAATCTTTCCCTCCTCCCCCAAGGCAC上游酶切位點(diǎn)為AgeI，下游為平末端。　　載體信息　　HinNotHinSacHinSacBglHinI(1711)　　I(1717)　　II(1749)　　II(1815)　　II(1856)　　I(1874)　　dIII(1914)目的-通過(guò)該培訓(xùn)員工可對(duì)保安行業(yè)有初步了解，并感受到安保行業(yè)的發(fā)展的巨大潛力，可提升其的專(zhuān)業(yè)水平，并確保其在這個(gè)行業(yè)的安全感。為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展，保障停車(chē)場(chǎng)安保新項(xiàng)目的正常、順利開(kāi)展，特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)

3、劃　　I(2291)　　雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)　　雙熒光素酶報(bào)告基因測(cè)試∶結(jié)合螢火蟲(chóng)和海洋腔腸熒光素酶先進(jìn)的共報(bào)告基因測(cè)試技術(shù)在用螢火蟲(chóng)熒光素酶定量基因表達(dá)時(shí),通常采用第二個(gè)報(bào)告基因來(lái)減少實(shí)驗(yàn)的變化因素。但傳統(tǒng)的共報(bào)告基因(比如CAT,β-Gal,GUS)不夠便利,因?yàn)楦髯缘臏y(cè)試化學(xué),處理要求,檢測(cè)特點(diǎn)存在差異。Promega提供一種先進(jìn)的雙報(bào)告基因技術(shù),結(jié)合了螢火蟲(chóng)熒光素酶測(cè)試和海洋腔腸熒光素酶測(cè)試。雙熒光素酶報(bào)告基因測(cè)試系統(tǒng),結(jié)合pRL載體系統(tǒng),表達(dá)第二個(gè)報(bào)告基因海洋腔腸熒光素酶,在單管中進(jìn)行雙熒光素酶報(bào)告基因測(cè)試,快速,靈敏,簡(jiǎn)便。系統(tǒng)還提供PLB裂解液,用來(lái)裂解在多孔板中培養(yǎng)的哺

4、乳細(xì)胞,不需操作單個(gè)樣品。對(duì)于正在使用螢火蟲(chóng)熒光素酶報(bào)告基因載體的研究人員。雙熒光素酶報(bào)告基因測(cè)試系統(tǒng)將使他們立即體會(huì)到該系統(tǒng)的便利。　　介紹目的-通過(guò)該培訓(xùn)員工可對(duì)保安行業(yè)有初步了解，并感受到安保行業(yè)的發(fā)展的巨大潛力，可提升其的專(zhuān)業(yè)水平，并確保其在這個(gè)行業(yè)的安全感。為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展，保障停車(chē)場(chǎng)安保新項(xiàng)目的正常、順利開(kāi)展，特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)劃　　雙報(bào)告基因用于實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中作相關(guān)的或成比例的檢測(cè),通常一個(gè)報(bào)告基因作為內(nèi)對(duì)照,使另一個(gè)報(bào)告基因的檢測(cè)均一化。檢測(cè)基因表達(dá)時(shí)雙報(bào)告基因通常用來(lái)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染培養(yǎng)細(xì)胞，帶有實(shí)驗(yàn)報(bào)告基因的載體共轉(zhuǎn)染帶有不同的報(bào)告基因作為

5、對(duì)照的第二個(gè)載體。通常實(shí)驗(yàn)報(bào)告基因偶聯(lián)到調(diào)控的啟動(dòng)子,研究調(diào)控基因的結(jié)構(gòu)和生理基礎(chǔ)。報(bào)告基因表達(dá)活力的相對(duì)改變與偶聯(lián)調(diào)控啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活力的改變相關(guān)，偶聯(lián)到組成型啟動(dòng)子的第二個(gè)報(bào)告基因，提供轉(zhuǎn)錄活力的內(nèi)對(duì)照,使測(cè)試不被實(shí)驗(yàn)條件變化所干擾?！　⊥ㄟ^(guò)這種方法,可減少內(nèi)在的變化因素所削弱的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性,比如,培養(yǎng)細(xì)胞的數(shù)目和活力的差別,細(xì)胞轉(zhuǎn)染和裂解的效率。　　使用螢火蟲(chóng)熒光素酶,結(jié)合氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT),β-半乳糖苷酶(β-Gal),或葡萄醛酸糖苷酶(GUS)的雙報(bào)告基因,近幾年已普遍使用。但這些雙報(bào)告基因組合削弱了熒光素酶操作的優(yōu)勢(shì),比如熒光素酶測(cè)試和定量可在幾秒鐘內(nèi)進(jìn)行,但CAT,β

6、-Gal和GUS測(cè)試法,則在定量前需要長(zhǎng)時(shí)間的保溫。另外,這些報(bào)告基因受限于它們的靈敏度和線性應(yīng)答范圍,必須注意不要超過(guò)這些范圍,內(nèi)源性細(xì)胞活力也會(huì)干擾這類(lèi)報(bào)告基因的使用。許多類(lèi)型的細(xì)胞有內(nèi)源β-Gal或GUS表達(dá),不利于準(zhǔn)確定量報(bào)告基因表達(dá),胞內(nèi)去乙酰酶活力干擾CAT活力測(cè)試。盡管在高溫下預(yù)處理細(xì)胞裂解液(1,2),會(huì)降低內(nèi)源性β-Gal和CAT測(cè)試的干擾，但這些處理也會(huì)快速失活熒光素酶。因此,在此類(lèi)雙報(bào)告基因檢測(cè)中,必須以不同的步驟分別處理共轉(zhuǎn)染的細(xì)胞裂解液。目的-通過(guò)該培訓(xùn)員工可對(duì)保安行業(yè)有初步了解，并感受到安保行業(yè)的發(fā)展的巨大潛力，可提升其的專(zhuān)業(yè)水平，并確保其在這個(gè)行業(yè)的安全

7、感。為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展，保障停車(chē)場(chǎng)安保新項(xiàng)目的正常、順利開(kāi)展，特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)劃　　理想的雙報(bào)告基因方法應(yīng)該使用戶能夠以螢火蟲(chóng)熒光素酶所具有的速度,靈敏和線性范圍對(duì)同一樣品中的兩個(gè)報(bào)告基因同時(shí)測(cè)定。這在傳統(tǒng)的報(bào)告基因,如CAT,β-Gal和GUS是不可能的,由于它們測(cè)試化學(xué),處理要求所固有的局限。相反,結(jié)合螢火蟲(chóng)(Photinuspyralis)和海洋腔腸(Renillareniformis)雙熒光素酶，Promega的