麥冬水溶性多糖opb的分離純化及抗氧化活性研究

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1、從本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對國民經(jīng)濟(jì)具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進(jìn)性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果麥冬水溶性多糖OPB的分離純化及抗氧化活性研究【摘要】目的：從麥冬中提取出水溶性粗多糖OP，經(jīng)分離純化，得到均一多糖OPB，并研究其組成、性質(zhì)以及抗氧化能力。方法：粗多糖經(jīng)DEAESepharoseCL6B柱層析分離純化得到OPB，經(jīng)HPLC和醋酸纖維素薄膜電泳法檢驗其均一性，超氧陰離子清除實驗和羥自由基清除實驗鑒定其抗氧化能力。結(jié)果：OPB是均一組分多糖，GC

2、分析表明它的單糖組成是葡萄糖。結(jié)論：OPB有較強(qiáng)的超氧陰離子清除作用?！娟P(guān)鍵詞】麥冬；水溶性多糖；分離純化；抗氧化活性基金項目:國務(wù)院僑辦科研基金資助項目(07QZR07);福建省自然科學(xué)基金計劃資助項目(Z)　　　　麥冬為百合科沿階草屬植物的干燥塊根，是常用的滋陰中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，有滋陰生津，潤肺清心的功能［1］。為了合理利用麥冬資源并尋找新的麥冬有效成份，本文對麥冬粗多糖進(jìn)行分離純化，并對其抗氧化活性進(jìn)行了研究。1材料與方法材料、試劑與儀器課題份量和難易程度要恰當(dāng)，博士生能在二年內(nèi)

3、作出結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對實驗條件等要有恰當(dāng)?shù)墓烙嫛谋緦W(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對國民經(jīng)濟(jì)具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進(jìn)性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果材料：麥冬，購于福建泉州百合藥店。試劑與儀器：氯化硝基氮藍(lán)四唑(NBT)，吩嗪硫酸甲酯(PMS)，脫氧核糖，硫代巴比妥酸(TBA)及還原型輔酶I(NADH·2Na)，標(biāo)準(zhǔn)品為Sigma公司試劑；DEAE-sepharoseCL6B為Pharmacia公司產(chǎn)品；其他試劑均為上?；瘜W(xué)試劑有限公司分

4、析純。MC992自動核酸蛋白分離層析儀，上海滬西分析儀器廠；高效液相色譜，安捷倫HP1100；氣相色譜儀，安捷倫6890N。實驗方法麥冬粗多糖的提取準(zhǔn)確稱取麥冬200g，加入XXmL0%乙醇，在50℃水浴中回流提取h，過濾，將殘渣烘干后取100g加入4000mL蒸餾水，90℃恒溫水浴下提取h，過濾，濾液在60℃減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至小體積，離心10min(3500r/min)，棄去沉淀物，上清液加入4倍體積無水乙醇，4℃過夜。次日離心，取沉淀，沉淀常規(guī)干燥得粗多糖。粗多糖的DEAESepharo

5、seCL6B柱層析制備00mg麥冬粗多糖溶于10mL蒸餾水，上樣，先后用蒸餾水和01MNaCl進(jìn)行洗脫，流速40mL/h,1管/1min，自動部分收集器收集。用苯酚硫酸法測定糖的分布情況，制定洗脫分布圖，按各波峰范圍部分收集洗脫液。由分離層析儀中的UV160A紫外光譜于280nm下同步檢測蛋白質(zhì)，記錄儀記錄。多糖樣品純度鑒定方法采用HPLC和醋酸纖維素薄膜電泳法，色譜柱為SUGARKS804，水作流動相，流速1課題份量和難易程度要恰當(dāng)，博士生能在二年內(nèi)作出結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果

6、，特別是對實驗條件等要有恰當(dāng)?shù)墓烙?。從本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對國民經(jīng)濟(jì)具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進(jìn)性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果mL/min，柱溫50℃，示差檢測器檢測。性質(zhì)分析［2-3］紅外光譜分析確定是否含有多糖特征吸收峰；采用氣相色譜法(GC)分析糖組成；糖含量測定采用苯酚硫酸法；蛋白質(zhì)含量測定采用考馬斯亮藍(lán)法。體外抗氧化實驗［4-5］超氧陰離子清除能力實驗用樣品濃度為0(對照)，25，50，70，100和120mg/mL；羥自由基清除作用樣品濃

7、度為0(對照)，，，，，25和50mg/mL。結(jié)果與分析.1粗多糖的提取與分離純化麥冬經(jīng)水提取，粗多糖得率為%，命名為OP。OP的蒸餾水洗脫液經(jīng)苯酚硫酸檢測只含有一個糖洗脫峰，但含量較少，暫且不做分析?！　P經(jīng)DEAE-SepharoseCL6BNaCl梯度洗脫曲線如圖1所示。由圖1可以看出，OP經(jīng)0-1MNaCl梯度洗脫，洗脫液經(jīng)苯酚硫酸檢測只含有一個糖洗脫峰，紫外檢測儀在280nm下也檢測到一個蛋白質(zhì)洗脫峰，并且與糖洗脫曲線相吻合，可能是結(jié)合蛋白，收集25-55管洗脫液，透析，濃縮，

8、醇沉，沉淀常規(guī)干燥命名為OPB。.2OPB的純度鑒定配制%的樣品液，0.μm纖維素膜過濾，進(jìn)樣量20μL。OPB的高效液相色譜結(jié)果(圖2)檢測出單一對稱峰，證明OPB是純度較好的樣品。OPB的醋酸纖維素薄膜電泳結(jié)果只顯示一條區(qū)帶，再次驗證OPB為純度較好的樣品。課題份量和難易程度要恰當(dāng)，博士生能在二年內(nèi)作出結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對實驗條件等要有恰當(dāng)?shù)墓烙?。從本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對國民經(jīng)濟(jì)具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進(jìn)性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新