高效液相色譜柱使用保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

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1、1.液相色譜柱的使川1.1使用前注意事項(xiàng)：色譜柱的貯存液若無(wú)特殊說(shuō)明，均為有機(jī)溶劑，反相柱當(dāng)用甲醇、乙臘或者高比例的甲醇/乙臘-水溶液，正相柱常用脫水處理后的純正己烷。使用前，一定要注意色譜柱的貯存液與待分析樣品的流動(dòng)相Z間焰否互溶。有些色譜柱，既可用于止相體系，也可用于反相體系，如色譜柱中的貯存液為止相而使用條件為反相時(shí)，必須用異丙醇先置換掉色譜林內(nèi)的貯存液，然后再川于反相條件，否則將會(huì)明顯減少色譜柱的使川壽命。在反相色譜中，如果流動(dòng)相屮緩沖鹽的濃度較高，必須先川低濃度的卬醇/乙臘-水溶液沖洗20min,否則緩沖鹽

2、在高濃度的有機(jī)相中很容易析出，從而使色譜柱堵塞，無(wú)法恢復(fù)。1.2色譜柱使用方向，裝色譜柱時(shí)應(yīng)使流動(dòng)相流路的方向與色譜柱標(biāo)簽上箭頭所示方向一致。除另有規(guī)定外，不宜反向使用，否則會(huì)導(dǎo)致色譜柱柱效明顯降低，無(wú)法恢復(fù)。1?3流動(dòng)相，流動(dòng)相中所使用的各種有機(jī)溶劑應(yīng)盡可能使用色譜純，水最好為超純水或重蒸水，如果流動(dòng)相含鹽還應(yīng)將配制好的流動(dòng)相經(jīng)0.45um或0.22Um的濾膜過(guò)濾。另外，裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)的在線過(guò)濾器等裝置應(yīng)清潔，否則將影響色譜柱壽命。以硅膠為某質(zhì)的各種鍵合相對(duì)酸和堿都很敏感，一般pH使川范圍為2.5?7.5

3、,應(yīng)參閱色譜柱使用說(shuō)明書(shū)，配制好流動(dòng)相后，必要時(shí)測(cè)定pH值，防止pH過(guò)酸過(guò)堿，以免色譜柱填料不可逆性損壞。1.4流速，色譜柱在使用的過(guò)程中，流速的變化，除特殊需要外，應(yīng)循序漸進(jìn)，緩慢變化。如C18硅膠柱每5分鐘的變化應(yīng)不超過(guò)0.2ml/min；凝膠柱每5分鐘的變化應(yīng)不超過(guò)0.05ml/min,AS11陰離子交換柱每5分鐘的變化應(yīng)不超過(guò)0.02ml/mino1.5樣品，樣品溶液應(yīng)經(jīng)0.45um或0.22um的濾膜過(guò)濾，或用固定相萃取小柱（SPE）對(duì)樣品溶液進(jìn)行預(yù)處理；如樣品成分復(fù)雜，部分組分有可能吸附在色譜柱上，最好使

4、用前置保護(hù)柱。在用正相色譜分析樣品時(shí)，如無(wú)特殊要求，所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水。1.6根據(jù)色譜條件規(guī)定，如果色譜柱達(dá)不到-?定的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，需及時(shí)更換。2.色譜柱的保養(yǎng)2.1反相色譜柱使川后的保存，如使用緩沖液或含鹽溶液作為流動(dòng)相，每犬實(shí)驗(yàn)結(jié)束厲，應(yīng)川10倍柱體積（對(duì)150mm柱長(zhǎng),約15ml）的低濃度的甲醇/乙惰-水溶液（10%?20%）沖洗,使色譜柱內(nèi)的鹽完金溶解脫出，再用較高濃度的甲醇/乙臘-水（50%）沖洗，故后用高濃度的甲醇/乙膳-水（80%?100%）沖洗，使色譜柱中的強(qiáng)吸附物質(zhì)沖洗出來(lái)。長(zhǎng)期保存，可以貯存

5、于甲醇或乙膳中。2.2凝膠柱用后的保存，如使用緩沖液或含鹽溶液作為流動(dòng)相，每次實(shí)驗(yàn)結(jié)朿后，應(yīng)用至少24倍柱體積的純化水沖洗，可保存三天；如長(zhǎng)期保存，再用至少24倍柱體積的0.05%疊氮鈉溶液沖洗后，密封保存，下次使用時(shí)，應(yīng)在平衡流動(dòng)相Z前，應(yīng)用至少24倍柱體積的純化水沖洗，然后再換成流動(dòng)相，正常使川。2.3離子交換柱用后的保存，如AS11陰離子交換柱，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，可冇?接保存于以0.04%磷酸二氫鈉溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）為流動(dòng)性中，至少一個(gè)刀；長(zhǎng)期保存，在實(shí)驗(yàn)結(jié)朿后，用水沖洗色譜柱后，再貯存于含5%甲醇或

6、含0.05%疊氮鈉的水中，密封保存。3.H常使用色譜柱的使用與保養(yǎng)1.1C18柱是最為常川的色譜柱。根據(jù)色譜條件需要，配置流動(dòng)相，過(guò)濾，按照正確的方向，將色譜柱與高效液相色譜儀相連，開(kāi)啟流速一?般為0.5ml/min,檢杳色譜柱兩端是否有漏液，以每5分鐘的變化應(yīng)不超過(guò)0.2ml/min的速度，將流速提高到規(guī)定值，一般為1.0ml/min，待平衡0.5?lh后，不迓樣，預(yù)覽一針，觀察基線或設(shè)計(jì)的梯度是否正常，正常后，按實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,先用低濃度的甲醇/乙月青-水溶液（10%?20%）以0.5ml/min的

7、流速?zèng)_洗lh,再用較高濃度的甲醇/乙膳-水（50%）沖洗沖洗0.5h,最后用高濃度的甲醇/乙睛-水（80%?100%）以1.0ml/min的流速?zèng)_洗lh；以每5分鐘的變化應(yīng)不超過(guò)0.2ml/min的速度，將流速降到0.5ml/min,關(guān)閉泵和柱溫箱，待柱溫降低室溫吋，將柱子卸下，密封保存。3.2TSKgelG2000SWXL凝膠柱主耍是用來(lái)檢測(cè)低分子量肝素鈣分子量和干擾素純度使用。根據(jù)色譜條件需要，制備流動(dòng)相和純化水，過(guò)濾，按照正確的方向，將色譜柱與高效液相色譜儀相連，開(kāi)啟流速-?般為0.2ml/min,檢杏色譜柱兩

8、端是否有漏液，以每5分鐘的變化應(yīng)不超過(guò)0.05ml/min的速度,將流速提高到規(guī)定值,一般為0.5?1.0ml/min,一般先用純化水以0.5ml/min的流速?zèng)_洗4h,將柱子中疊氮鈉溶液置換T凈。再換規(guī)定的流動(dòng)相,按照上述步驟,提高流速,達(dá)到規(guī)定值后，待平衡2h后，觀察基線是否止常，止常后，按實(shí)驗(yàn)耍求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，再純化水，按照上述步