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《中國西門塔爾太行類群牛肉質(zhì)性狀與slc27a1基因多態(tài)性關(guān)聯(lián)分析》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、中國西門塔爾太行類群牛肉質(zhì)性狀與SLC27A1基因多態(tài)性關(guān)聯(lián)分析 摘要：為探索SLC27A1基因?qū)εＨ赓|(zhì)性狀的影響，選取中國西門塔爾牛太行類群牛公牛、閹牛各20頭為研究對象，采用PCR法分析SLC27A1的基因遺傳多態(tài)性。檢測到SNP位點(diǎn)為S5650：T>C，該位點(diǎn)存在有3種基因型，其中CC基因型頻率較高（62.5%），TT基因型頻率最低（12.5%）。采用GLM對內(nèi)質(zhì)相關(guān)性狀與SLC27A1基因進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果表明，剪切力、肉色a、肉色b表型中，CC與TT及CT與丌差異均極顯著（P0.05），閹牛與公牛間對肉質(zhì)的彈性與咀嚼性差異顯著（PC位點(diǎn)突變對中國西門塔爾牛太行類群肉質(zhì)性狀
2、存在一定的遺傳效應(yīng)， 關(guān)鍵詞：SLC27A1基因；肉質(zhì)性狀；SNP；中國西門塔爾太行類群 SLC27A1（S0lutecarrierfamily27member1），又稱作FATP（Fattyacidtranspon6pmteins），是脂肪酸運(yùn)輸?shù)鞍准易宄蓡T，具有調(diào)節(jié)長鏈脂肪酸在機(jī)體局部和全身系統(tǒng)中新陳代謝的作用。提純的SLC27A1具有類似乙酰輔酶A的活性，并通過催化機(jī)體內(nèi)雙層分子膜中的脂肪酸不斷轉(zhuǎn)化成脂肪酸乙酰輔酶A來加快脂肪酸的吸收。通過組織中SLC27A1的活化作用，可以促使胰島素調(diào)控長鏈脂肪酸的攝入，且SLC27A1具有分配脂肪酸到機(jī)體各組織中的作用。SLC27A1基
3、因敲除小鼠脂肪組織中的脂滴半徑小于正常小鼠，且在低溫環(huán)境下維持體溫恒定的能力很差，這說明SLC27A1在運(yùn)送長鏈脂肪酸通過質(zhì)膜維持能量平衡、產(chǎn)生熱量等生理過程中起著至關(guān)重要的作用，是脂肪代謝的重要調(diào)節(jié)因子。SLC27A1基因失活的小鼠可免受食源性肥胖的困擾?！ rdovas等為獲得牛的SLC27A1的DNA片段，利用人類該基因的mRNA序列擴(kuò)增了一段505bp牛的該基因片段并掃描了牛的BAC文庫，得到了包含SLC27A1的BAC克隆，并將SLC27A1基因定位于染色體7q11-q12上，該基因有12個外顯子，編碼646個氨基酸，近年來已在7號染色體上發(fā)現(xiàn)了一些與脂肪代謝相關(guān)聯(lián)的性狀
4、位點(diǎn)（QTL）。 本研究利用PCR測序技術(shù)針對西門塔爾太行類群雜交牛的SLC27A1基因進(jìn)行擴(kuò)增，采用測序技術(shù)進(jìn)行基因型檢測，將不同基因型與脂肪相關(guān)性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，以期找到與產(chǎn)奶性狀相關(guān)的分子標(biāo)記，以期為標(biāo)記輔助選擇在提高肉質(zhì)性能上的應(yīng)用提供理論依據(jù)?！ ?.材料與方法 1.1試驗(yàn)材料 1.1.1試驗(yàn)動物與屠宰檢測迅速取剛屠宰后的中國西門塔爾太行類群牛公牛、閹牛各20頭，每頭牛血3mL，2mLACD抗凝，保溫箱中帶回，用于提取基因組DNA。取眼肌部位10cm3肉送檢。取眼肌肉與皮下脂肪各0.5g，放入液氮冷凍后置于-80℃保存?！ ?.1.2引物SLC27A1基因比較保守，不
5、同物種間編碼區(qū)差異較小，所以使用小鼠同源序列設(shè)計(jì)SLC27A1引物，其擴(kuò)增片段信息及B-actin基因引物如表1所示，B-actin基因引物根據(jù)文獻(xiàn)獲得?！ ?.2SLC27A1基因型檢測 1.2.1PCR擴(kuò)增PCR反應(yīng)體系：在100uLEP管中加入10×6PCR緩沖液2.0uL、2.5mmol/LdNTP1.6uL、TagDNA聚合酶1U/uL、上下游引物各30ng、基因組DNA約100ng、加去離子水至總反應(yīng)體積20uL。反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min，35個循環(huán)（94℃變性30s，59℃退火45s，72℃延伸90s），72℃延伸10min，4℃保存。取2uLPCR產(chǎn)物與0，
6、5uL溴酚藍(lán)緩沖液混勻，0.8%瓊脂糖凝膠，110v電泳0.5h后，紫外燈下觀察有無擴(kuò)增產(chǎn)物?！ ?.2.2PCR產(chǎn)物的回收測序PCR產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒純化回收，將回收得到的PCR產(chǎn)物與pMDl9T-vector連接，經(jīng)轉(zhuǎn)化，搖菌，菌液送北京奧科生物有限公司進(jìn)行測序，檢測樣品的SNP基因型?！ ?.3定量的方法及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 1.3.1牛皮下脂肪RNA的提取按照QIAGEN脂肪RNA提取試劑盒說明書步驟進(jìn)行，采用Trizol一步法提取牛皮下脂肪與肌肉中總RNA?！ ?.3.2標(biāo)準(zhǔn)陽性質(zhì)粒的制備、標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立及定量PCR將制備的陽性標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒進(jìn)行10倍梯度稀釋，取1
7、010至1038個稀釋度作為標(biāo)準(zhǔn)模板，同時設(shè)陰性對照。PCR反應(yīng)體系為：SYBRGreenMasterMix7.5uL，上游引物0.3uL，下游引物0.3uL，組織cDNA或B-actin質(zhì)粒模板1.0uL，加無菌水至15uL。反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性30s；95℃變性5s，60℃退火15s，72℃延伸20s，共40個循環(huán)。溶解曲線反應(yīng)：55℃30s：每30s提高0.5℃至95℃，共81個循環(huán)。為了保證每個組織目的基因相對表達(dá)的可重復(fù)性，消除因加樣造成的誤差
