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1、UPLC法測(cè)定三七總皂苷含量 摘要〔目的〕建立超高效液相色譜法測(cè)定三七總皂苷提取物中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd的含量?！卜椒ā巢捎肬ltimateXB-C18色譜柱（2.1mm×50mm，1.8μm）；以水（A）-乙腈（B）為流動(dòng)相，梯度洗脫（0～4min，19%B；4～8min，19%～35%B；8～10min，35%～95%B；10～11min，95%B）：檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm，柱溫25℃，流速0.6mL/min，進(jìn)樣量2μL。結(jié)果：三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷
2、Rb1、人參皂苷Rd分別在0.0069～0.5520、0.0280～2.2400、0.0038～0.3040、0.2970～2.3760、0.0073～0.5840mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。平均回收率分別為98.18%、99.43%、97.26%、98.54%、99.02%。RSD分別為1.03%、0.64%、0.98%、1.37%、0.78%?！步Y(jié)論〕該方法分析時(shí)間短，洗脫溶劑消耗小，方法準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于三七總皂苷提取物的質(zhì)量控制?！ ￡P(guān)鍵詞UPLC法；三七總皂苷；提取物；含量 中圖分類號(hào)R284文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)1
3、007-5739（2016）14-0274-02 三七[Panax6notoginseng（Burk）F.H.Chen]為五加科植物，以干燥根及根莖入藥，有散瘀止血、消腫止痛的功能[1]。三七總皂苷是三七的主根或根莖經(jīng)加工制成的總皂苷提取物，為血塞通、血栓通等中成藥的原料，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)[2-4]、泌尿系統(tǒng)[5-6]、肝損傷[7]、肺損傷[8]等疾病有顯著的療效，已收錄在《中國藥典》2015年版一部中[9]。目前藥典收錄的方法中，其含量測(cè)定項(xiàng)下方法是采用常規(guī)的高效液相色譜法，即用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，采用乙腈和水作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度
4、洗脫，流速為1.5mL/min。該法分析時(shí)間較長(zhǎng)，需要60min以上，流速較大。故存在流動(dòng)相消耗大、時(shí)間消耗久、液相系統(tǒng)壓力偏高、出來的峰型也不理想等情況。到目前為止，采用新的檢測(cè)手段改善上述問題的方法鮮有報(bào)到。因此，筆者通過研究超高效液相色譜法（UPLC）來測(cè)定三七總皂苷含量的方法。結(jié)果表明，該方法分析時(shí)間大為縮短，洗脫溶劑消耗較小，可以為三七總皂苷的含量測(cè)定提供科學(xué)參考?！ ?材料與方法 1.1儀器與試劑 高效液相色譜儀（美國安捷倫1290），檢測(cè)器為二極管陣列檢測(cè)器；色譜柱（UltimateXB-C18柱，2.1mm×50.0
5、mm，1.8μm，月旭材料科技上海有限公司）；超聲波清洗機(jī)（江蘇昆山超聲儀器有限公司）；電子分析天平（日本島津）?！ ∪呖傇碥諏?duì)照提取物（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110870-201002）5種皂苷類物質(zhì)含量標(biāo)定為：三七皂苷R1（6.9%），人參皂苷Rg1（28%），人參皂苷Re（3.8%），人參皂苷Rb1（29.7%），人參皂苷Rd（7.3%）；甲醇（色譜純，月旭科技）；水為重蒸餾水。 1.2色譜條件 色譜柱（UltimateXB-C18柱，2.1mm×50.0mm，1.8μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm；柱溫25℃；流速0.
6、6mL/min；進(jìn)樣量2μ6L；以水為流動(dòng)相A，以乙腈為流動(dòng)相B，按表1中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫。 1.3溶液制備 1.3.1對(duì)照提取物溶液的制備。取三七總皂苷對(duì)照提取物適量，精密稱定，加70%甲醇溶解并稀釋成每1mL含2.5mg的溶液，即得。 1.3.2供試品溶液的制備。取樣品25mg，精密稱定，置10mL量瓶中，加70%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得?！ ?.4色譜分析 取供試品溶液和對(duì)照提取物溶液各2μL，按照色譜條件進(jìn)行測(cè)試?！ ?.5線性關(guān)系考察 分別稱取三七總皂苷對(duì)照品適量，用70%甲醇溶解并稀釋制成每1mL含0.2
7、5、0.50、1.25、2.50、5.00、7.50、20.00mg的溶液，按照色譜條件，分別精密吸取各濃度對(duì)照品溶液2μL，自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，以各色譜峰峰面積（Y）對(duì)其濃度（X）進(jìn)行線性回歸?！ ?.6精密度考察 吸取對(duì)照品溶液2μL，按照色譜條件，自動(dòng)進(jìn)樣器連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)行精密度考察[10]?！ ?.7穩(wěn)定性考察 參照色譜條件，取制備的供試品溶液，在室溫條件下放置，分別在0、1、2、4、8、12、24、36h進(jìn)樣測(cè)定，記錄每針樣品中5種皂苷類成分的峰面積?！ ?.8重復(fù)性考察6 取樣品6份，按照上述方法制備供試品溶
8、液，再根據(jù)色譜條件進(jìn)樣測(cè)試5種皂苷類成分的含量?！ ?.9加標(biāo)回收率考察 取三七總皂苷樣品6份，每份12.5mg，精密稱定，置10mL量瓶中，分為3組，同時(shí)加入對(duì)照品，第1組分別加800μL，第2組分別加
