多價(jià)噬菌體分離篩選及靶向滅活

多價(jià)噬菌體分離篩選及靶向滅活

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1、多價(jià)噬菌體分離篩選及靶向滅活土壤病原菌的應(yīng)用研究*2017年度江蘇省環(huán)保科研課重點(diǎn)項(xiàng)目(2017005)、2017年江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金項(xiàng)(CX(17)3047)、中國科學(xué)院青年創(chuàng)新促進(jìn)會(huì)(2018350)、國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(41771350)資助趙遠(yuǎn)超1,2,葉茂2?通訊作者,E-mail:yemao@issas.ac.cn作者簡介:趙遠(yuǎn)超(1993-)男黑龍江省齊齊哈爾市碩士研究生主要從事噬菌體分離純化、定向進(jìn)化及農(nóng)業(yè)噬菌體療法在致病細(xì)菌污染土壤中的靶向滅活研究E-mail:2016103027@njau.edu.cn收稿日期:年-

2、月-日;收到修改稿日期:,夏冰3,焦文濤4,馮彥房5,都瑞軍6,杜道林6,張忠云2,黃丹2,孫明明1,武俊1,胡鋒1,蔣新2,杜良成7(1南京農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,土壤生態(tài)實(shí)驗(yàn)室,南京?210095)(2中國科學(xué)院土壤環(huán)境與污染修復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(中國科學(xué)院南京土壤研究所),南京210008)(3安徽省環(huán)境科學(xué)研究院,合肥230022)(4中國科學(xué)院生態(tài)環(huán)境研究中心,城市與區(qū)域生態(tài)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京100085)(5江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所,南京210014)(6江蘇大學(xué)環(huán)境安全工程學(xué)院,環(huán)境生態(tài)研究所,鎮(zhèn)江,212013)(7Neb

3、raska大學(xué)-Lincoln校區(qū),化學(xué)系,美國,68588)摘 要農(nóng)田土壤中殘留和滋生多種病原菌會(huì)對人體健康和生態(tài)環(huán)境帶來顯著的安全隱患,開展針對性的生物修復(fù)研究十分迫切。噬菌體療法靶向滅活土壤中病原菌的技術(shù)為修復(fù)此類污染土壤提供了全新途徑。本研究以南京城郊某奶牛場牛糞堆積池周邊,糞腸桿菌和假單胞菌復(fù)合污染農(nóng)田土壤為例,首先篩選和純化獲得兩株專一型噬菌體(YSZ1和YSZ5),再人為加速其宿主譜的表達(dá)過程,獲得對應(yīng)的多價(jià)噬菌體(YSZ1R和YSZ5K),并進(jìn)行生物學(xué)特性(形態(tài)、核酸、最佳感染復(fù)數(shù)、一步生長曲線等)鑒定,發(fā)現(xiàn):在水相和污染土壤中不同噬

4、菌體對于同步滅活病原菌的能力依次是YSZ5K>YSZ1R>YSZ5>YSZ1,并且施用多價(jià)噬菌體療法有助于維護(hù)和改善修復(fù)后土壤微生物生態(tài)功能多樣性與穩(wěn)定性。本研究結(jié)果可為噬菌體療法靶向滅活土壤中多種病原菌提供切實(shí)可行的修復(fù)技術(shù)。關(guān)鍵詞??病原菌;土壤;噬菌體療法;靶向滅活中圖分類號(hào)????S154.1???????文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼???A???????由于我國現(xiàn)階段畜禽糞便安全化處理技術(shù)或環(huán)境管理仍存在一定的不足或缺失,許多城郊畜牧業(yè)養(yǎng)殖廠周邊的農(nóng)田土壤常成為殘留和滋生人畜共患病原菌的高風(fēng)險(xiǎn)熱點(diǎn)區(qū)域,13嚴(yán)重影響人體健康和環(huán)境安全[[1]Zhu?J?C,?

5、Zhang?Z?Q,?Fan?Z?M,?et?al.?Biogas?Potential,?Cropland?Load?and?Total?Amount?Control?of?Animal?Manure?in?China[J].?Journal?of?Agro-Environment?Science,?2014,?33(3):?435-44]。因而,針對病原菌污染農(nóng)田土壤,開展必要的生物修復(fù)技術(shù)研究十分迫切。噬菌體療法(Phage?Therapy)為修復(fù)上述污染土壤提供了一種全新途徑。細(xì)菌噬菌體(簡稱噬菌體)是一類較為專屬捕食活體宿主細(xì)菌而存活的生物體

6、,在土壤、水、空氣乃至人/動(dòng)物體表或腸道內(nèi)均廣泛分布了大量噬菌體,據(jù)估算其總量達(dá)到1031數(shù)量級(jí)[[2]Sharon?I,?Morowitz?M?J,?Thomas?B?C,?et?al.?Time?series?community?genomics?analysis?reveals?rapid?shifts?in?bacterial?species,?strains,?and?phage?during?infant?gut?colonization[J].?Genome?Research,?2013,?23(1):111-120]。噬菌體療法是指通

7、過分離、篩選、純化和富集宿主病原菌的專屬噬菌體之后,向污染土壤中添加特定噬菌體菌液,定向侵染滅活病原菌的修復(fù)方式[[3]Alves,?Diana?R.?Development?and?characterisation?of?a?responsive?polyvalent?bacterio-phagetherapeutic[D].CityofBath,DEPARTMENTOFCHEMISTRYUNIVERSITYOFBATH,2015-][[4]Bhattacharjee?A?S,?Choi?J,?Motlagh?A?M.?Bacteriophage?

8、therapy?for?membrane?biofoul-ing?in?membrane?bioreacto

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