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《茶多酚對(duì)岡田酸誘導(dǎo)大鼠海馬神經(jīng)元tau蛋白過(guò)度磷酸化的作用與其對(duì)學(xué)習(xí)記憶的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、茶多酚對(duì)岡田酸誘導(dǎo)大鼠海馬神經(jīng)元Tau蛋白過(guò)度磷酸化的作用及其對(duì)學(xué)習(xí)記憶的影響碩士研究生：寺旨導(dǎo)教師：專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：李洪玉鄒原教授生理學(xué)摘要目的：阿爾茨海默病(Alzheimer’Sdisease，AD)目前是老年人群癡呆的主要原因，隨著人口老齡化的加劇，全球發(fā)病人數(shù)日益增多。由于AD嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量并給社會(huì)和家庭帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)，因此對(duì)于該病的防治顯得尤為重要。AD的臨床表現(xiàn)主要為進(jìn)行性智能減退，病理特征為老年斑(SP)、神經(jīng)元纖維纏結(jié)(NFTs)、海馬錐體細(xì)胞顆粒空泡變性和神經(jīng)元的缺失。SP的形成與p．樣淀粉蛋白(AD)過(guò)量產(chǎn)生和沉積有關(guān)。到目前為止，它們與神經(jīng)細(xì)胞退行性變性之間的關(guān)
2、系尚不十分清楚。NFT的主要成分是過(guò)度磷酸化的Tau蛋白，它聚積在退行性變性神經(jīng)元的胞體并與AD患者臨床癡呆程度正相關(guān)i1J，且Tau蛋白的病理改變出現(xiàn)在癡呆癥狀之前并獨(dú)立于AD異常12】。Tau蛋白是一種微管相關(guān)蛋白，主要存在于神經(jīng)元，具有促進(jìn)微管組裝和維持微管穩(wěn)定的功能。在AD患者腦中Tau蛋白喪失了正常生理功能，從而纏結(jié)形成NFTs。已知有多種蛋白磷酸酯酶，如PP．2A，PP．1參與Tau蛋白的AD樣異常磷酸化。茶多酚(teapolyphenol，TP)是從綠茶中提取出來(lái)的一種多酚類(lèi)化合物，其在B．環(huán)和C．環(huán)上的酸性羥基有很強(qiáng)的供氫能力，是天然的抗氧化劑。其抗氧化能力明顯優(yōu)于強(qiáng)氧化
3、劑維生素C、維生素E【3。。大量研究已證實(shí)，TP在抑菌、抗病毒、抑制腫瘤、防治心血管疾病等方面具有良好功效，同時(shí)還具有益肝保腎作用。且有文獻(xiàn)證實(shí)，TP在體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中能夠減輕Ap誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性【4】，而長(zhǎng)期給小鼠EGCG(表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯，茶多酚的主要成分)可以誘導(dǎo)海馬APP水平的下降【5】，此外TP還能夠抑制AB原纖維的形成、延長(zhǎng)和脫穩(wěn)定性【61。但是TP是否對(duì)于AD中Tau蛋白的過(guò)度磷酸化具有保護(hù)作用，目前尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)岡田酸(okadaicacid，OA)誘導(dǎo)大鼠海馬神經(jīng)元Tau蛋白過(guò)度磷酸化實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，研究茶多酚?duì)OA致海馬神經(jīng)元Tau蛋白過(guò)度磷酸化的作用
4、及其大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響。方法：選用岡田酸(okadaidacid，OA)來(lái)誘導(dǎo)Tau蛋白過(guò)度磷酸化。健康雄性SD大鼠共60只，體重250．3009。將大鼠隨機(jī)分為6組，每組l0只。包括正常對(duì)照組(normal)，溶媒對(duì)照組(vehicle。contr01)，OA損傷組(OAmodel)和l00mg／kg、250mg／kg和625mg／kg不同濃度茶多酚預(yù)處理組(TP)。除正常對(duì)照組大鼠外，其它各組大鼠分別灌胃給予等量生理鹽水或不同濃度TPo灌胃至第2l天時(shí)對(duì)各組大鼠進(jìn)行空間學(xué)習(xí)與記憶能力訓(xùn)練和行為學(xué)測(cè)試。至第27天時(shí)，向右海馬背側(cè)(前囟后3．8mm，中線旁開(kāi)2．5mm，深度3mm)定向注
5、射OA1．59L(0．4731．tg，10％DMSO)，于10min內(nèi)緩慢注射，留針5min。溶媒對(duì)照組施以等體積10％DMSO。OA注射后第二天即第28天時(shí)，進(jìn)行水迷宮考試，考試后處死大鼠，收集標(biāo)本。制作大鼠右側(cè)腦組織石蠟切片，免疫組織化學(xué)染色觀察腦組織中海馬處磷酸化的Tau蛋白表達(dá)分布情況。Westernblot方法檢測(cè)腦海馬內(nèi)磷酸化的Tau蛋白的表達(dá)并進(jìn)行定量分析。結(jié)果：1．TP降低OA致海馬神經(jīng)元過(guò)度磷酸化Tau蛋白的表達(dá)免疫組化結(jié)果顯示，OA損傷組大鼠海馬神經(jīng)元胞體和突起的Tau．pSer396表達(dá)較正常對(duì)照組和溶媒對(duì)照組大鼠海馬區(qū)顯著增多，呈現(xiàn)棕黃色染色，TP預(yù)處理組的Tau
6、．pSer396陽(yáng)性表達(dá)較OA損傷組減少，其中以250mg／kg和625mg／kg劑量組的作用較明顯。Westernblot實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)免疫組化的結(jié)果，定量分析表明，OA損傷組Tau．pSer396的表達(dá)量比正常組和溶媒對(duì)照組增加，而TP預(yù)處理各組則比OA損傷組降低，且250mg／kg和625mg／kg劑量組降低明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0．01)。2。TP改善OA致大鼠空間記憶障礙隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加，各組大鼠逃避潛伏期逐漸縮短，在給予OA注射前TP預(yù)處理的三個(gè)組大鼠與OA損傷組大鼠相比其逃避潛伏期差異有顯著性(p<0．01)。TP預(yù)處理的三個(gè)組和OA損傷組大鼠在給予OA前后穿越平臺(tái)的
7、次數(shù)經(jīng)Kruskal。WallisH檢驗(yàn)有顯著性差異(p<0．05)。在總時(shí)間一定的情況下，OA損傷組大鼠給予OA后，在目的象限停留時(shí)間及在目的象限游泳距離占總游泳距離的百分比顯著降低(p
