利用孕婦外周血中胎兒有核紅細(xì)胞無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷染色體非整倍體異常

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1、1雌卜學(xué)位淪殳利用孕婦外周血中胎兒有核紅細(xì)胞無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷染色體非整倍體異常華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院婦產(chǎn)科博士研究生張銘導(dǎo)師陳漢平教授中文摘要第一部分利用胎兒血紅蛋白表型顯微操作分選母血中胎兒有核紅細(xì)胞[摘要]目的建立高純度、高特異性的細(xì)胞分選技術(shù)，富集純化母血中胎兒有核紅細(xì)胞(fetalnucleatedredbloodcells，F(xiàn)NRBC)并探索最佳分選時(shí)機(jī)。方法188例孕婦外周血，經(jīng)密度梯度離心初步富集后行血紅蛋白Y鏈(gammachainofheamoglobin，Y—Hb)免疫組化染色，以顯微操作技術(shù)挑取陽性細(xì)胞。采用單細(xì)胞引物

2、延伸預(yù)擴(kuò)增(primerextensionpreamplification，PEP)及聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreaction，PCR)技術(shù)檢測Y染色體特異性片段SRY基因。結(jié)果月ffJL有核紅細(xì)胞具有鮮明的形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)特征。188例母血中每例檢測0．6×108個(gè)有核細(xì)胞，186例可檢出FNRBC，數(shù)目為5～89個(gè)。正常妊娠孕婦共160例，早、中、晚孕FNRBC的數(shù)目分別為10．44±3．19，29．96±4．10，22．oo±3．55，三組之間具有極顯著差異(P

3、eStriction，F(xiàn)GR)妊娠18例，母血中FNRBC數(shù)均顯著高于同孕期『F常妊娠組(P

4、JL紅蛋白Y鏈為分選標(biāo)志，結(jié)合顯微操作技術(shù)，可以有效獲取高純度、高濃度研究模板，為后繼準(zhǔn)

5、確、特異的細(xì)胞來源鑒定及基因分析奠定鏨礎(chǔ)。中弓qlEl母㈣fII：NRBC數(shù)目最高，胎兒染色體非整倍體異常妊娠FNRBC升高，可為進(jìn)一步的無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷提供依據(jù)和指導(dǎo)。[關(guān)鍵詞]胎兒血紅蛋白顯微操作分離單細(xì)胞基因分析產(chǎn)前診斷第二部分應(yīng)用短串聯(lián)重復(fù)序列鑒定母血中胎兒有核紅細(xì)胞[摘要]目的探索x染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(shorttandemrepeats，STR)位點(diǎn)在無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷中用于胎兒細(xì)胞鑒定、性別判斷等的可行性。方法47對孕婦及其配偶外周血，以血紅蛋白y鏈染色結(jié)合顯微操作分離獲取母血中胎兒有核紅細(xì)胞，經(jīng)PEP擴(kuò)增細(xì)胞基因組后，對2個(gè)x染色體STR

6、位點(diǎn)DXSl01、DXS6797及AMXY(XandYamelogeninalleles)基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增。同時(shí)對各對夫妻外周血DNA進(jìn)行上述基因位點(diǎn)擴(kuò)增，聚丙烯酰胺及瓊脂糖電泳后胎兒樣本及其雙親的基因型對比分析判斷胎兒性別及NRBC來源。結(jié)果3例擴(kuò)增失敗，其他44例聯(lián)用DXSlol、DXS6797及AMXY基因診斷女胎、男胎的靈敏度分別為90％(18／20)、91．67％(22／24)，胎兒性別診斷符合率為90．91％(40／44)。結(jié)論采用多個(gè)X-STR位點(diǎn)及AMXY基因擴(kuò)增作為母血中胎源細(xì)胞鑒定系統(tǒng)，不局限于男胎，可準(zhǔn)確鑒定細(xì)胞來源并判斷胎兒

7、性別，而且快速、價(jià)廉，具有廣闊的發(fā)展前景。一，[關(guān)鍵詞]短串聯(lián)重復(fù)序列；胎兒有核紅細(xì)胞：無創(chuàng)性；產(chǎn)前諺斷#中f}技人學(xué)ItiJi棄f，、’學(xué)院第三部分利用母血中胎兒有核紅細(xì)胞產(chǎn)前診斷染色體非整倍體異常試驗(yàn)一母血中胎兒有核紅細(xì)胞熒光原位雜交診斷染色體非整倍體異常[摘要]目的探討利用孕婦外周血中胎兒有核紅細(xì)胞進(jìn)行染色體非整倍體異常的產(chǎn)前診斷的可行性。方法根據(jù)B型超聲及孕中期AFP、uE3、B—HCG三聯(lián)血清學(xué)檢測，從進(jìn)行遺傳咨詢的114例孕婦中篩選出高危孕婦，另有1例產(chǎn)婦，因新生兒為Down綜合征(Downsyndrome，DS)兒于產(chǎn)后6天采集母血。以

8、血紅蛋白Y鏈染色結(jié)合顯微操作分離獲取母血中胎兒有核紅細(xì)胞，采用CEPx／Y及LSI21探針對孕產(chǎn)婦血樣中的胎兒FNRBC進(jìn)行熒光原位雜交分析。結(jié)果共篩選出高危孕婦34例，分娩DS兒產(chǎn)婦1例，共16例接受母血中胎兒NRBC的熒光原位雜交(Fluorescenceinsituhybridization，F(xiàn)ISH)分析。FISH結(jié)果示Down綜合征兒2例，Turner綜合征兒2例，男胎8例，女胎8例。除1例診為Turner綜合征胎兒的實(shí)際核型為正常二倍體男性外，其余15例FISH結(jié)果均與實(shí)際核型一致，診斷符合率為93．75％(15／16)。結(jié)論利用母血中胎

9、兒有核紅細(xì)胞進(jìn)行熒光原位雜交可成功診斷胎JL311j整倍體異常，在國內(nèi)尚屬首例，并為該無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷技術(shù)走向