資源描述：
《孕婦外周血中胎兒有核紅細胞在dmd胎兒產(chǎn)前基因診斷中的應用的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、摘要背景：目前已確定孕婦外周血中存在胎兒細胞，這就為利用胎兒細胞進行產(chǎn)前診斷提供了一種無創(chuàng)傷性的診斷方法，可在不干擾胎兒宮內生長的前提下獲取胎兒細胞，從而可避免羊膜腔穿刺，絨毛活檢，胎兒宮內取血等方法對孕婦和胎兒的危害，具有取材方便，風險小，不受孕婦年齡病史等影響的優(yōu)點。近年來研究發(fā)現(xiàn)胎兒有核紅細胞是最理想的用于產(chǎn)前診斷的胎兒細胞。然而由于胎兒有核紅細胞在孕婦外周血中較少(1：107～10s)，故對其進行富集、純化是進行胎兒性別和遺傳性疾病產(chǎn)前診斷的先決條件。目前常見的分離純化方法有：磁激活細胞揀選法(螂)，流式細胞技術，熒光細胞揀選法
2、(FACS)等。但這些方法都需要特異性抗體，而胎兒有核紅細胞無絕對特異性抗體；且費用高，不易在臨床推廣．密度梯度離心法是根據(jù)細胞在體積，密度，沉降系數(shù)，滲透壓等方面的不同設計的一種簡單有效，較實用的富集和分離方法，適合國內實驗條件，它能從孕婦外周血細胞中分出單個核細胞層(內含胎兒有核紅細胞)，所得的單個核細胞懸液進一步純化分離，可得到較高純度的胎兒有核紅細胞；而本實驗采用顯微操作儀挑取在形態(tài)上被識別的有核紅細胞，所獲得的有核紅細胞純度較其它方法更高，費用更低。將所獲得的有核紅細胞用于X連鎖隱性遺傳病(DMD)的胎兒產(chǎn)前診斷中，為無創(chuàng)傷性
3、產(chǎn)前基因診斷提供可靠的實驗依據(jù)和方法。目的：探索應用密度梯度分離法結合顯微操作法分離孕婦外周血中胎兒有核紅細胞在杜氏進行性肌營養(yǎng)不良癥(DMD)胎兒進行無創(chuàng)傷性產(chǎn)前基因診斷的可行性。方法：取已生育過DMD患兒的孕婦(孕15--一16周)外周血10ml，采用密度梯度離心法分離有核細胞層，滴片、瑞氏染色、顯微鏡下識別，并在顯微操作儀下挑取胎兒有核紅細胞，然后提取有核紅細胞的DNA；同時提取孕婦、其丈夫及DMD患JIAb周血的DNA。將胎兒有核紅細胞的DNA先進行15N的隨機引物預擴增，然后對預擴增產(chǎn)物以及外周血DNA的dystrophin基
4、因中4個短串聯(lián)重復Ⅱ摘要序列多態(tài)位點片段(STR-44，STR．45，STR．49和STR．5’．DysII)進行PCR擴增，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，進行家系連鎖分析。結果：1．光鏡下根據(jù)有核紅細胞的形態(tài)特點找到并挑取有核紅細胞：家系1，8個；家系2，6個；家系3，7個。2．各家系的有核紅細胞Ⅸ"烴隨機引物預擴增后的DNA量，可足夠用于診斷。3．對三個家系的dystrophin基因進行連鎖分析，準確檢測出三例，其中男性患兒一例，正常女性一例，攜帶者一例。診斷的結果與用羊水進行產(chǎn)前診斷證實一致。結論：1．密度梯度離心分離法結合顯微操作方
5、法分離胎兒有核紅細胞，能分離較高純度的胎兒有核紅細胞2．有核紅細胞的D1妣經(jīng)隨機引物預擴增能得到足夠的模板量3．分離的胎兒有核紅細胞可用于DMD遺傳病的產(chǎn)前診斷。關鍵詞：孕婦；有核紅細胞；分離；DMD；胎兒：產(chǎn)前診斷111AbstractBackground：Therearefetalbloodcellsinpregnantwomenblood，whichfortheuseoffetalcellsforprenataldiagnosisofanon—invasivediagnosticmethods，cannotinterferewit
6、hf色鎰growthundertheprerequisiteofobtainingfetalcells，whichcanbeavoidedAmnioticpuncture，villusbiopsy，fetalblood，andothermethodsofpregnantwomenandfetalharm，hastakenconvenient,smallrisk，pregnantwomen,agedfromhistoryandSOonthemerits．Inrecentyears，thestudyfoundthatfetalredbloo
7、dceilsistheidealplaceforprenataldiagnosisoffetalcells．However,duetOfetalnucleatedredbloodcellsinmaternalbloodinless(1：107一i08)，SOtheirenrichment，thepurificationiscarriedouttheSeXofthefoetusandprenataldiagnosisofhereditarydiseasesofthepre-conditions．Purificationofthecurre
8、ntcommonmethods：magneticactivatedcellselectionmethod(MAC．S)，flowcytometry，fluorescencecellselectionmeth
